本文是一篇临床医学论文，本研究用qRT-PCR和Western-blot法检测卵巢癌细胞（SKOV3、A2780细胞）和正常卵巢细胞（IOSE-80细胞）中CTLA-4的表达水平，发现卵巢癌细胞中CTLA-4 mRNA和蛋白表达水平均较正常卵巢细胞明显升高，与组织研究结果一致。
1材料和方法
1.1实验材料
1.1.1主要实验试剂
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1.2实验方法
1.2.1生物信息学
（1）GEPIA数据库
GEPIA（Gene Expression Profiling Interactive Analysis）数据库（http://gepia.cancer-pku.cn/index.html）是一个交互式网络应用程序，用于基因表达分析，整合了有价值的癌症相关RNA测序资源，包括TCGA（The Cancer Genome Atlas）和GTEx（Genotype-Tissue Expression）数据库的9736个肿瘤和8587个正常样本。本研究中首先利用GEPIA数据库分析CTLA-4在多个肿瘤组织和其对应正常组织中的基因表达差异，进一步对数据库中纳入的426例卵巢癌组织和88例正常卵巢组织进行分析，获得CTLA-4在卵巢癌和其正常组织中的表达情况。
（2）K-M plotter数据库
Kaplan-Meier plotter数据库（http://kmplot.com/analysis）是一个在线进行生存分析较权威的网站，数据较全，包括基因芯片和RNA-seq来源的高通量数据，数据来源包括GEO、EGA和TCGA，主要用于评估生存标志物的价值。卵巢癌是其中研究最多的癌种，具有极大优势，利用K-M plotter数据库绘制CTLA-4的高低表达在卵巢癌中的生存曲线图，评估其与患者预后之间的关联（以P<0.05有统计学意义）。生存分析的终点选择无进展生存期（PFS）和总生存期（OS）。
（3）微阵列数据信息
NCBI-GEO是一个公开的基因芯片/基因图谱公共数据库[20]，经过筛选，得到GSE14001、GSE105437、GSE18520和GSE14407四个在卵巢癌和正常卵巢组织中的基因表达谱。GSE14001、GSE105437、GSE18520和GSE14407的基因芯片数据均基于GPL570平台（[HG-U133_PLUS_2]Affymetrix Human Genome U133+2.0阵列），分别包括20个OC组织和3个正常卵巢（Ovrian，OV）组织、10个OC组织和5个正常OV组织、53个OC组织和10个正常OV组织、12个OC组织和12个正常OV组织。
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2结果
2.1生物信息学
2.1.1 CTLA-4在卵巢癌中高表达
首先利用GEPIA数据库分析CTLA-4在多种组织中的表达情况，结果发现与正常组织相比CTLA-4在多种人肿瘤组织中高表达，表达具有差异性（P<0.05，图2-1a）。
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2.2组织水平
2.2.1 CTLA-4在上皮性卵巢肿瘤和卵巢良性肿瘤中的表达
根据免疫组织化学染色的结果，CTLA-4在60%上皮性卵巢癌中可被发现为阳性表达，在45.5%交界性肿瘤中可被定义为阳性，在13.6%良性肿瘤中为阳性表达，统计学分析发现各组间的表达差异具有统计学意义（2=11.353，P=0.003），表明与卵巢良性肿瘤相比，CTLA-4的阳性表达在卵巢癌组织中显著增高（表2-4、图2-6）。
临床医学论文参考
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3 讨论 ....................................... 31
4 结论 ........................................... 34
3讨论
无论是化疗还是放疗，都会在杀死癌细胞的同时损害患者的身体，降低免疫力。免疫疗法因其创新性和优异的疗效而受到广泛关注。CTLA-4抑制剂的研究一直是肿瘤免疫治疗领域的热点之一。CTLA-4是第一个被发现的免疫检查点，是一个白细胞分化抗原和T细胞跨膜受体，已被证明通过与CD7相关的B28和B7结合来维持T细胞的活性，并参与免疫反应的负向调节[24]。CTLA-4抗体通过阻断肿瘤微环境和AKT磷酸化通路中的Foxp3阳性Treg细胞诱导抗肿瘤免疫，有效扩增T细胞，增强抗肿瘤活性[25]。目前，主要的CTLA-4抑制剂有曲美木单抗和伊匹木单抗，已被FDA一致批准用于治疗黑色素瘤、非小细胞肺癌、晚期肾癌和其他癌症[26-28]。与其他肿瘤相比，CTLA-4在卵巢癌中的研究仍然不成熟，有必要对CTLA-4在卵巢癌中的应用进行全面分析，以探索其单独使用或与其他疗法联合使用的潜力。
为了评估CTLA-4在卵巢癌中的表达情况，实验前期通过生物信息学方法探索CTLA-4在卵巢癌中的潜在机制。首先利用GEPIA数据库发现CTLA-4在多种肿瘤组织与正常组织中的表达均具有差异性，其中，已有研究发现CTLA-4在黑色素瘤、非小细胞肺癌、肝癌中呈现高表达状态；此外，生物信息学技术分析发现CTLA-4在卵巢癌中的表达也显著高于卵巢正常组织。为了进一步探索CTLA-4与卵巢癌预后的关系，利用K-M plotter数据库绘制生存曲线，结果表示CTLA-4表达水平越高患者的生存期越短，可见CTLA-4的表达量与患者预后负相关。利用GEO数据库分析差异基因也发现CTLA-4在卵巢癌组织中表达上调。利用DAVID 6.8数据库对包括CTLA-4在内的差异基因进行分析发现，卵巢癌差异基因主要通过参与T细胞增殖的负调控、信号转导、谷氨酸能突触形成、PI3K-Akt信号通路、人瘤病毒感染、TGF-β信号通路等途径参与癌症的发生发展。有研究表明，乳腺癌的获得性耐药性可由CTLA-4通过JAK/STAT/PI3K途径介导[29]，在肿瘤微环境中，T细胞是肿瘤进展的命运改变者，CTLA-4作为失活剂是控制T细胞活性的重要角色，CTLA-4能够抑制卵巢癌患者的免疫系统，促使卵巢癌患者预后不良，但在卵巢细胞中，CTLA-4的分子机制尚不清楚。进一步探索CTLA-4在卵巢癌细胞中的分子机制可为卵巢癌的治疗提供新思路。
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4结论
1.CTLA-4在卵巢癌组织中呈现高表达；
2.细胞水平对卵巢癌细胞系mRNA和蛋白表达水平的检测，发现CTLA-4在卵巢癌细胞中呈高水平表达
3.CTLA-4敲低实验表明CTLA-4可显著促进癌细胞增殖。
参考文献（略）