本文是一篇临床医学论文，本文结果表明在常氧条件下AR过表达可促进成软骨相关分子表达，抑制基质金属蛋白酶-13生成，对软骨细胞具有一定保护作用。而在低氧环境中，AR过表达可以促使成软骨相关分子表达下降，基质金属蛋白酶-13 表达上升，这说明，当AR过表达时，在低氧作用下，可能会促进软骨细胞去分化，诱发软骨组织降解，导致关节软骨破坏。
2.材料与方法
2.1实验细胞
本实验细胞为兔膝关节软骨细胞，来源于安徽医科大学实验动物中心提供的6-8周龄普通级，雄性新西兰大白兔。
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2.2主要试剂的配制与储存条件
(1)原代细胞培养基：50ml胎牛血清与500ml高糖型DMEM培养基充分混匀，置于4℃冰箱保存。
(2)0.3%II型胶原酶溶液：取100mgII型胶原酶粉剂，完全溶于33.33ml高糖型DMEM培养基中，充分溶解混匀后，置于超净工作台内，使用0.22μm过滤器进行过滤除菌并分装成4ml/支，锡纸包裹后避光储存于-20℃冰箱。
(3)电泳液：1L纯水中加入一瓶电泳粉，磁力搅拌器搅拌至充分溶解，4℃冰箱储存备用。
(4)转膜液：200ml无水乙醇中加入一瓶转膜粉，加入800ml纯水，磁力搅拌器搅拌至充分溶解，4℃冰箱储存备用。
(5)TBST溶液：2L纯水中加入1袋TBS粉，磁力搅拌器搅拌至充分溶解，随后加入2ml Tween20搅拌至充分溶液，室温保存。
(6)封闭液：20mlTBST溶液中加入1g脱脂奶粉，置于摇床上至完全溶解，配制成5%脱脂奶粉封闭液，现配现用。
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3.实验结果
3.1原代软骨细胞形态
本实验采用组织块-酶消化法获取原代细胞，接种时原代细胞在光学显微镜下观察呈类圆形，培养4天时细胞呈多角形散在分布（图1A），随着培养时间延长细胞明显增殖，第7天时细胞呈鹅卵石样排列（图1B），成功分离并培养出原代兔膝关节软骨细胞。
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3.2软骨细胞鉴定结果
3.2.1 甲苯胺蓝染色
实验成功分离培养获得细胞后进行甲苯胺蓝染色，其染色结果呈阳性表达，软骨细胞胞质呈浅蓝色，细胞核呈深蓝色，且细胞呈多角形，贴壁生长（图2）。
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3.实验结果 ........................................... 23
3.1原代软骨细胞形态 ................................ 23
3.2软骨细胞鉴定结果 .................................. 24
4.讨论 ..................................... 32
5.结论 ............................. 35
4.讨论
骨关节炎是一种常见的退行性关节疾病，以关节软骨丧失，软骨下骨硬化，滑膜炎症等为主要特征。骨关节炎不仅仅是自然老化的过程，更是关节异常改建的结果[33]。骨软骨交接处包含关节软骨的深层和软骨下骨，该区域复杂结构的稳定是维持关节功能稳定的重要因素之一[34]。生物因子，机械刺激的改变会造成该区域结构和功能特征的变化。软骨细胞是一种高度分化的体细胞，其增殖、迁移能力弱[35]。本研究通过体外实验初步探索了AR过表达对软骨细胞成软骨能力的影响，结果证明，在低氧条件下，AR过表达可下调成软骨特异性因子，且该作用可能与抑制细胞自噬相关。
关节软骨无神经、无血管、无淋巴组织，细胞含量较低[36]。由于缺乏血供，关节软骨长期处于低氧环境中。但软骨具有一定厚度，所以随其厚度的增加导致氧分压呈一定梯度变化，在正常情况下，关节软骨内氧浓度在0.5%到10%之间变化，表层约为7%，深层软骨组织氧浓度小于1%[10, 37]。软骨细胞是关节软骨内唯一的细胞类型。软骨细胞通过特殊的机制可以在低氧环境下维持正常的生理功能。诱导生成软骨细胞外基质成分就是其中一种机制。研究表明，在5%的低氧环境下培养关节软骨细胞可以显著的增加蛋白多糖和胶原的合成[38, 39]。低氧环境可诱导HIF-1α上调，从而促进软骨细胞sox-9，col2a1，aggrecan表达，以达到保护软骨细胞抑制其凋亡的目的[40]。另外一个可以维持低氧环境下软骨组织正常生理性功能的机制是软骨细胞内线粒体稳态。对于健康的关节软骨，软骨细胞内线粒体可以在低氧环境下调控细胞内的代谢活动，生成ATP，对成软骨产生有效调控。通过这种方式可以维持正常的细胞分化，受损的软骨细胞也可以被替换[41-43]。
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5.结论
1.常氧条件下，AR过表达可促进软骨细胞成软骨相关因子表达；低氧条件下，AR过表达抑制成软骨相关因子表达。
2.P-S6可能参与AR过表达对软骨细胞成软骨能力的影响。
参考文献（略）