不同强度有氧运动后比目鱼肌外泌体miR -206抑制糖尿病小鼠心肌细胞凋亡的机制探讨

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论文字数:42522 论文编号:sb2024072410020952612 日期:2024-07-30 来源:硕博论文网

本文是一篇临床医学论文,本实验未对实验小鼠行超声心动图检查,缺失直接评估运动改善心脏功能的手段。本实验中未提取血清外泌体进行miR-206检测,仅在体外细胞实验对肌源性外泌体的作用进行验证,尚需在体内进行外泌体注射干预实验,进一步验证肌源性外泌体在生物体内发挥的作用。
2 文献综述
2.1糖尿病心肌病研究进展
2.1.1糖尿病心肌病概述
T2DM是一种常见慢性代谢性疾病,其发病机制与胰岛素分泌缺陷及接受功能障碍密切相关[26]。糖尿病心血管并发症包括心肌病变和冠状动脉病变,前者是以心力衰竭为主要表现的特异性糖尿病相关性心脏疾病[6, 7]。近年多项实验研究、病理学以及临床流行病学[27-29]显示DCM是与冠状动脉病变无关的病理状态,也是糖尿病的主要并发症,DCM患者的心功能不全多在没有冠状动脉粥样硬化和高血压情况下出现。DCM早期心脏超声会反映其舒张功能下降,可伴有心律失常,但收缩功能正常[30]。目前已知DCM病发与炎症[31]、氧化应激[32]、线粒体功能[33]、细胞凋亡和自噬[34]、心肌纤维化等有关[35]。
2.1.2 糖尿病心肌病与心肌细胞凋亡
心肌细胞是再生能力极弱的永久性细胞,若死亡过多,会导致心功能障碍。1972年,Rubler等[36]第一次定义了DCM。研究发现DCM患者心肌细胞凋亡明显增加[37, 38],而这是DCM的重要病因[39]。细胞凋亡是受基因调节的程序性死亡,在维持生物组织器官的正常运转中发挥关键的作用,它参与包括缺氧、缺血再灌注、心肌梗死及终末期心力衰竭等心血管疾病发病过程[40]。高血糖和其诱发的微小血管病变是促使心肌细胞凋亡的主要原因[41]。受高血糖、高血脂、炎症等因素影响,心肌细胞的Ca2+摄取会出现障碍,延长动作电位持续时间,从而缩短心脏舒张期[42],这些因素交互作用,加剧心肌细胞凋亡和坏死[36, 43]。
研究发现,抗细胞凋亡治疗能显著改善DCM病情进展[44, 45],这证实了心肌细胞凋亡在DCM中的重要作用。因此,抑制心肌细胞凋亡可能是治疗DCM的关键环节。
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2.2 miR-206研究进展
2.2.1 miR-206概述
miR NAs具有组织特异性,已证实mi RNAs失调通常与特定组织相关的疾病有关[46]。Ludwig等人[47]的研究显示约17%的miR NAs家族主要在某些组织中特异表达。骨骼肌特异性miRNA(myomiR NAs)是一类骨骼肌特异性高表达的miR NA,包括miR-1、miR-133a、miR -133b、miR -206、miR-208、miR-208b、miR-486、miR-499等[48-51]。其中人类和小鼠骨骼肌miR NA中近25%表达为miR-1、miR -133a、miR-133b和miR-206[51, 52],发挥促进骨骼肌细胞的发育的功能[53, 54],在肌肉组织中特异性存在。miR-206作为myomiR NAs之一,是唯一只在骨骼肌中特异性表达的miR NAs[52]。人类miR-206基因长度为22个核苷酸,位于第6号染色体[55],其所属的miR-1家族在序列结构上有相似性:该家族的6个成员分别分布在miR-1-2/miR-133a-1、miR -1-1/mi R-133a-2和miR -206/miR-133b这3个同源基因簇中[56],miR-206的序列与miR-1-1和miR-1-2的序列在种子区以外仅有4个核苷酸的差异。随着研究[57]的深入,人们进一步发现机体中起到主要作用的是miR-206-3p,而非miR-206-5p。正常生理条件下,mi R-206只在骨骼肌中特异性存在表达[58],在大脑内低表达[59],心脏中也极少表达而无法检测[60]。在胚胎成长发育的过程中,miR-206/miR-133b基因簇出现在在成肌分化过程中的晚期,表现出阶段特异性且只在脊椎动物中表达[61]且主要富集于慢收缩/氧化纤维组成的肌肉(比目鱼肌和跖肌)[62, 63],这说明miR -206位点的来源可能与脊椎动物骨骼肌的更高复杂性有关,因为无脊椎动物没有不同的纤维类型,也没有脊椎动物骨骼肌中具有的卫星细胞。
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3 实验对象及方法
3.1 动物实验对象
实验中所用的8周龄T2DM模型雄性db/db小鼠及17只同窝db/m小鼠从常州卡文斯实验动物有限公司购入(动物合格证编号:NO. 320730221100033868)。饲料及垫料从湖北省动物实验研究中心购入。于武汉体育学院SPF级实验动物实验室分笼饲养,每笼4只,室温22-24℃,压强15-20Kpa,湿度55-65%。饲养过程保证食物及饮用水干净充足,隔一天定期清洁鼠笼,确保小鼠生存环境卫生干燥符合要求。

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3.3 实验动物运动干预方案
使用小动物跑台机器模拟有氧运动对各组小鼠进行运动干预,由于小鼠晚间生理活动活跃,每次干预时间为17点至21点。NC组、DM组进行正常生理活动,自由饮食,不进行运动训练干预。LE、ME、HE组小鼠在坡度为 0°的跑台上进行8周有氧运动干预。先进行一周的适应性跑台运动:第1天速度5m/min,时间10min,第2-5天,速度逐渐加至各组正式干预所需速度,依据前人研究[125-128],LE、ME、HE组速度分别为5m/min、10m/min、15m/min,时间逐渐加至30min。适应性运动结束后,休息2日,然后开始正式干预。
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3 实验对象及方法 ................................ 10
3.1 动物实验对象 .................................... 10
3.2 实验动物分组 ............................. 10
3.3 实验动物运动干预方案........................... 10
4 实验结果 ............................... 24
4.1 有氧运动可改善db/db小鼠体重及心脏体重比 ......................... 24
4.2 有氧运动未明显改善db/db小鼠血糖水平 ...................... 25
4.3 有氧运动可改善db/db小鼠心肌组织形态结构 ......................... 27 
5 分析讨论 ................................. 45
5.1 有氧运动可改善糖尿病小鼠基础情况 ......................... 45
5.2 有氧运动可抑制糖尿病小鼠心肌细胞凋亡 ................................ 45
5.3 有氧运动可调控骨骼肌及其外泌体miR-206 ............................. 46
5 分析讨论
5.1有氧运动可改善糖尿病小鼠基础情况
T2DM是全球范围广泛流行的终身慢性代谢性疾病,肥胖及持续性高血糖可致胰岛素抵抗及胰岛β细胞功能下降[131, 132]。肥胖是T2DM的主要可预防原因,T2DM患者与非T2DM患者BMI有显著差异[133]。本实验选择与临床T2DM患者表现相似的8周龄db/db小鼠作为T2DM模型鼠进行实验。本研究发现,在不改变饮食习惯的前提下,无论强度如何,8周的有氧运动训练都能限制db/db小鼠的体重增长。空腹血糖、糖耐量及胰岛素耐受情况均有改善趋势,尽管效果不太显著。这表明运动对糖尿病小鼠体重和血糖有调节作用,能在一定程度上延缓糖尿病进展。本研究中小鼠的胰岛素抵抗状态未被逆转,可能由于是本研究中小鼠病情较重,或运动的强度持续时间未达到逆转高血糖症状的运动量。
而观察各组小鼠心肌细胞形态后发现,db/db小鼠心肌组织形态较正常小鼠而言明显异常。结合心肌细胞凋亡率增加的TUNEL染色结果、心肌肥大的WGA染色结果、心脏体重比降低等结果来看,糖尿病小鼠心肌出现了DCM相关的病理改变。8周有氧运动训练后,不同运动强度下的db/db小鼠心肌的异常病理形态均有不同程度改善。提示规律的运动训练可以触发心肌的适应性,引起生理性肥厚,继而保留或增强心脏收缩功能[134]。或许可以用运动过程中心脏的适应性生理性肥大来解释低强度及高强度的改善效果更为明显的现象。
综上所述,有氧运动训练干预能够有效减少T2DM引起的体重及血糖增加,改善心肌病理性形态结构,其效果因运动强度不同而不同。

临床医学论文参考
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6 结论
6.1主要结论
不同强度有氧运动尤其是8周中强度运动可通过上调比目鱼肌外泌体miR-206减少心肌细胞凋亡,改善糖尿病心肌病变,在糖尿病心肌病中发挥心脏保护作用。这一过程可能是由比目鱼肌外泌体miR-206远程激活PTP1B/IRS-1/PI3K/Akt通路完成的。
参考文献(略)


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