本文是一篇临床医学论文，本研究发现脓毒症患者血浆中Nectin-2水平显著升高，血浆Nectin-2水平升高在脓毒症KPS小鼠中起保护作用，其作用机制是调控巨噬细胞功能：抑制炎症因子分泌，减少巨噬细胞焦亡，提高肺组织中巨噬细胞的细菌清除效率。
2研究对象选择及资料收集
2.1 研究对象
2.1.1脓毒症疹断标准
《第三版脓毒症与感染性休克定义的国际共识》中脓毒症的诊断标准：机体由感染引发的器官功能障碍，SOFA评分≥ 2（表2-1-1，表2-1-2）[1]。
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2.2数据收集
本实验所需临床样本均从河南大学淮河医院检验科采集，并从本院的电子病历系统中获取并记录其相应人员的基本信息。研究中所有的临床样本采集和数据收集均严格遵循有关诊断标准和规范程序。
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3材料与方法
3.1实验动物
本实验所用小鼠均为斯贝福生物的BALB/c小鼠，实验小鼠在河南大学淮河医院标准动物实验室统一饲养，饲养环境如温度，湿度，日光黑暗周期和通风等严格符合实验动物饲养标准。另外，每笼喂养小鼠不超过6只，每周进行两次卫生打扫，及时更换垫料、补充饲料和饮水，以保证实验小鼠良好的生长环境。本实验研究中的所有动物实验均已经过河南大学淮河医院动物伦理委员会的审查和监督。
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3.2研究方法
将采集的临床血液样本，置于冰上运输尽快转运至实验室，禁止剧烈晃动。4℃，2000 g，离心15 min，离心后小心吸取上清血浆，避免接触血细胞，转至冻存管中，于-80℃超低温冰箱贮存。操作过程中详细记录样本信息，以防丢失错乱。
（1）试剂准备
1）PBS溶液：称取1 g PBS粉末溶于1 L双蒸水，使用隔膜真空泵过滤杂质。
2）洗涤液：向过滤后的PBS溶液中加入Tween-20，得到含有0.05% Tween-20的PBST洗涤液。
3）封闭液：称取BSA加至洗涤液中，得3% BSA溶液。
4）样本稀释液：称取BSA加至洗涤液中，得0.1% BSA溶液。
5）检测抗体稀释液：称取BSA加至洗涤液中，得0.5% BSA溶液。
6）显色液：3,3',5,5'-四甲基联苯胺。
7）终止反应液：2N H2SO4，将约41 mL 98%的浓硫酸缓慢地加入双蒸水中，最终总体积定容至100 mL。
（2）实验步骤
1）包被：每孔中加入100 µL捕获抗体，用封板模密封，4℃孵育过夜。第二天，弃去包被液，洗板，每孔加入300 µL洗涤液，静置约1 min，弃去，如此重复清洗3次。倒扣在吸水纸上拍板，以清除残余洗涤液，每孔加300 µL封闭液，室温孵育1 h，然后再次洗板、拍干。 2）加样：取包被好的孔板，每孔中加入处理好的标准品及检测样品各100 µL，室温孵育2 h。 3）洗涤：洗板3-5次，拍干。 4）加酶标抗体：用稀释液按所需体积稀释抗体，每个检测孔加100 µL稀释抗体液中，用封板模密封，室温孵育1 h。 5）洗涤：洗板3-5次，拍干。 6）显色：每孔加入显色液100 µL，室温避光显色20 min。 7）终止：每孔加入50 µL的终止液，终止反应。 8）采用450 nm，750 nm波长，使用酶标仪测出OD值，计算结果。
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3 材料与方法........................................ 9
3.1 研究材料 .......................................... 9
3.1.1 实验仪器 .......................................... 9
3.1.2 实验试剂及耗材 ............................ 10
4结果 ......................23
4.1 血浆Nectin-2水平升高与脓毒症密切相关 ..................................... 23
4.1.1 脓毒症患者终末阶段血浆中Nectin-2水平显著升高 ................................ 23
4.1.2 脓毒症患者人群中血浆Nectin-2水平显著升高 ........................................ 24
5讨论....................41
5讨论
Nectin-2与脓毒症的关系尚无报道。在本研究，我们发现血浆Nectin-2（1）在脓毒症人群中显著升高，并与脓毒症的病情变化相关，可能是脓毒症发生和发展的新型标志物；（2）能够直接作用于肺部巨噬细胞；（3）调控巨噬细胞重要功能，包括抑制炎症因子分泌和增强细菌（肺炎克雷伯杆菌）吞噬；（4）能够抑制革兰氏阴性菌（肺炎克雷伯杆菌）感染所引发的肺组织细胞焦亡；（5）在肺炎克雷伯杆菌肺部感染所致（小鼠）脓毒症中起保护作用，显著降低病死率。
临床医学论文参考
脓毒症是机体对感染的炎症反应失调，进而导致器官功能障碍的临床综合征，具有高发病率和高死亡率。研究脓毒症的发病和致死机制，寻找脓毒症相关生物标志物有重大意义。脓毒症患者是一个极具异质性的人群[12]，我们获取临床样本来筛选分析与脓毒症相关的血浆蛋白，在包含大量患者的研究中评估其潜在关系，以确保可能影响研究结果的因素，如年龄、器官功能障碍、感染类型、合并症等，进而探索脓毒症病理生理的相关机制。通过定量蛋白组学筛选，发现血浆中Nectin-2蛋白浓度的变化在脓毒症病情进展中存在显著变化。随后又扩大样本数据将505位脓毒症患者纳入分析范围，明确Nectin-2与脓毒症有着显著关联。脓毒症病情恶化进展为脓毒性休克，有更高的病死率，休克状态的恢复也表示脓毒症病情的一定好转。在这其中，我们发现Nectin-2在脓毒症患者由休克状态转为非休克状态中有明显升高，这提示Nectin-2与脓毒症脓毒症病情变化有相关性，在脓毒症患者血浆中Nectin-2蛋白浓度升高，且对疾病发展起一定缓和作用。
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6结论
脓毒症患者血浆中Nectin-2水平显著升高，血浆Nectin-2水平升高在脓毒症KPS小鼠中起保护作用，其作用机制是调控巨噬细胞功能：抑制炎症因子分泌，减少巨噬细胞焦亡，提高肺组织中巨噬细胞的细菌清除效率。本研究表明Nectin-2是脓毒症潜在的生物标志物，且可能具有脓毒症治疗价值。
参考文献（略）