本文是一篇临床医学论文，笔者经过研究，得出结论：Bufalin改善心肌纤维化的机制是通过抑制ISO诱导的心脏炎症反应、抑制凋亡水平、抑制TGF-β1/Smads通路。
第2章材料和方法
2.1实验材料和试剂
2.1.1实验动物
选用40只雄性，SPF级、C57BL/6j小鼠(6周龄，体重20±5 g)，购买于斯莱克景达公司(长沙，中国)。
2.1.2动物饲养
实验动物被安置在南昌大学医学院动物中心，昼夜循环12小时，普通维持饲料（SPF级）喂养。环境温度保持在24±2℃，相对湿度55±5%。小鼠适应性饲养1周后再进行动物实验操作。
2.1.3实验仪器
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2.2实验方法
2.2.1构建动物模型40只C57BL/6j小鼠适应性饲养7日后，随机分成4组，每组10只小鼠：
1）Control组：腹腔注射PBS连续3周，每组10只小鼠；
2）Bufalin组：腹腔注射Bufalin 0.5mg/kg，隔天一次，连续3周，每组10只小鼠；
3）ISO组：腹腔注射ISO 10mg/Kg，连续2周，每组10只小鼠；
4）ISO+Bufalin组：腹腔注射3周Bufalin的同时包括2周的ISO，每组10只小鼠。
具体动物模型流程处理方案如下图B所示。
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第3章结果
3.1超声心动图检测小鼠心功能结果
通过超声心动图来评估小鼠的心功能。比较CON组、BF组、ISO组、ISO+BF组4组小鼠心功能。超声心动图（图1-1）显示，与CON组相比，ISO组EF％和FS％水平显著下降，提示心功能明显障碍(图1-2)。与ISO组相比，ISO+BF处理组明显抑制了ISO诱导的小鼠心功能障碍，表现为EF％和FS％水平显著升高，提示心功能明显改善（图1-2）。以上数据可表明BF可改善ISO诱导的小鼠心功能障碍。
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3.2小鼠心脏重量指数结果
1）小鼠心脏重量指数结果
首先，称量小鼠体重及小鼠心脏重量，计算心脏重量指数结果（CWI）。如表1-1所示，ISO组小鼠心脏重量（HW）和小鼠体重（BW）明显大于CON组。相比之下，ISO+BF处理组可降低小鼠的HW和BW。同样，与CON组相比，ISO组CWI升高，而ISO+BF处理组降低了小鼠的CWI(图2-1)。
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第3章 结果................................... 16
3.1 超声心动图检测小鼠心功能结果 ......................... 16
3.2 小鼠心脏重量指数结果....................................... 17
3.3 小鼠心脏H&E染色结果 ............................... 17
第4章 讨论.......................................... 27
第5章 结论与展望 .............................. 31
5.1 结论 ............................... 31
5.2 展望 ................................. 31
第4章讨论
现如今，随着平均寿命的逐渐增加，人口老龄化也逐渐发展，心血管疾病发病率和死亡率也在升高。心肌纤维化的病理改变是众多心血管疾病发展的基础。纤维化主要是细胞外基质（主要是胶原纤维）在间质中的过度沉积引起的，成人心脏细胞外基质（ECM）的主要成分是Ⅰ型胶原蛋白（85%）和Ⅲ型胶原蛋白（11%）[25]，而胶原蛋白纤维对伤口愈合和组织的再生起着十分重要的作用[26]。随着心肌纤维化的发生发展，心脏组织的正常结构和成分可能被破坏，导致心脏顺应性下降、心脏的收缩/舒张功能发生障碍，从而诱发一系列病理生理过程。
异丙肾上腺素（ISO）是一种β受体激动剂，对β1、β2受体的选择性很低，对α受体几乎不起作用。它激活β1时，使得心脏兴奋性增加，导致心率增快、心肌收缩力增强、心脏耗氧量增加、心脏传导速度增快，窦房结不应期缩短。同时，ISO也可通过激活β1-AR-ROS信号途径[27],刺激心肌细胞释放一些细胞因子,来促进炎症发生，同样使心肌成纤维细胞活化，从而导致心肌纤维化的发生[28]。因此，腹腔注射ISO诱导的小鼠心肌纤维化模型是公认可行的。
Bufalin是一种强心类固醇，已被多项研究所报道，其具有抗肿瘤、抗炎、抗纤维化等特性。有报道称，Bufalin可以多效性调节肿瘤疾病中的信号转导级联系，它可以调节JAK/STAT，Wnt/β-Catenin，Akt/mTOR，EGFR等信号途径。Janus激酶（JAK）/信号转导器和转录激活剂（STATs）信号转导途径是响应一些细胞外配体所需的胞内信号级联反应。本质上，磷酸化诱导JAK活化，磷酸化的激酶受体胞内成分，从而激活下游STAT蛋白的募集[29,30]。有研究报道，Bufalin通过抑制STAT3信号途径，从而阻断癌症相关成纤维细胞（CAF）诱导的结直肠癌细胞的侵袭和转移。同样，Bufalin成功抑制了CAF细胞诱导的小鼠的肝转移结节的产生[31]。Bufalin可通过作用于细胞周期并诱导细胞发生死亡（包括细胞凋亡，坏死性凋亡，自噬和衰老）来减少肿瘤细胞增殖[32-35]。在心血管疾病方面，也有大量研究说明了Bufalin在心脏中的作用。比如，在ApoE小鼠用西方饮食（WD）喂养3周的模型中，发现用Bufalin治疗ApoE小鼠可防止动脉粥样硬化斑块的发展[36]。作为Na+/K+-ATP酶抑制剂，Bufalin对心血管和肾脏系统能产生影响，可以收缩血管，增强血管收缩，增加心脏收缩力，提高血压，并引起钠尿/利尿，因此与低肾素，体积扩张型高血压的病理生理学有关[37]。
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第5章结论与展望
5.1结论
1）Bufalin可以改善ISO诱导的小鼠心功能减退和心肌纤维化水平；
2）Bufalin改善心肌纤维化的机制是通过抑制ISO诱导的心脏炎症反应、抑制凋亡水平、抑制TGF-β1/Smads通路。
参考文献（略）