本文是一篇药学论文，本研究首先基于“质量标志物五原则”预测刺五加叶和无梗五加叶的潜在质量标志物，其次通过网络药理学分析刺五加叶和无梗五加叶中具有抗肿瘤活性的成分，发现在二者中共同存在的活性成分chiisanoside可能具有良好的抗肿瘤活性且与铁死亡有关。
第一章 刺五加叶研究进展
1.1 刺五加叶化学成分研究进展
自1970年俄罗斯学者Suprunov从刺五加叶中分离得到以齐墩果酸为苷元的刺五加苷A、B、C、D、E和F[6]，至今国内外学者已从刺五加叶中分离鉴定出近200种成分，主要包括黄酮、三萜及其苷、苯丙素、有机酸以及维生素、蛋白质和微量元素等[7-26]。
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1.2 刺五加叶药理活性研究进展
1.2.1 对心脑血管的作用
刺五加叶具有保护心肌细胞，抗心律失常的作用。研究表明，刺五加叶中的皂苷能够减少心肌缺血-再灌注损伤（MI/RI）模型大鼠的心肌梗死面积，通过激活ERK1/2途径减少心肌细胞凋亡。刺五加叶中的3,4-裂环羽扇豆烷型三萜类化合物divaroside（DVS）能够完全缓解BaC l2引起的室性心律失常，说明刺五加叶中含有的皂苷类成分对保护心肌具有一定的潜力[27-28]。
刺五加叶具有神经保护作用，对治疗缺血性脑卒中具有一定的效果。研究发现，口服刺五加叶后，缺血性脑卒中大鼠模型的脑指数和脑含水量显着降低，血清和脑组织中的神经递质含量与空白模型大鼠的脑组织相似。并能通过减少机体的氧化和炎症损伤，在一定程度上治疗缺血性脑卒中，为缺血性脑卒中的治疗提供了一定支撑[29-30]。
刺五加叶提取物能够调节小鼠的认知功能，通过对小鼠进行一系列的学习和记忆测试发现，刺五加叶皂苷能够增强小鼠的记忆能力，可以不经代谢转移到脑内。有学者通过网络药理学分析表明，刺五加叶皂苷是通过AGE-RAGE 信号通路和PI3K-Akt信号通路发挥神经保护作用治疗血脑屏障（BBB）的[31]。
从刺五加叶中分离得到的三萜类化合物chiisanogenin对U46619诱导的血小板聚集的作用是乙酰水杨酸（ASA）的50倍，对肾上腺素和花生四烯酸(AA)诱导的血小板聚集的作用是乙酰水杨酸（ASA）的10-20倍。刺五加叶中的皂苷提取物对实验性脑缺血大鼠血液流变学及血小板功能的异常变化有明显的改善作用[32-33]。
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第二章 无梗五加叶研究进展
2.1 无梗五加叶化学成分研究进展
1997年国内学者王广树等从无梗五加叶中分离得到一种三萜糖苷和β-谷甾醇，至今已从无梗五加叶中分离鉴定出近70余种成分，主要包括黄酮类、三萜类、苯丙素类以及维生素、蛋白质和微量元素等[7，20，45-51]。
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2.2 无梗五加叶药理活性研究进展
2.2.1 抗肿瘤
无梗五加叶提取物具有良好的抑制肿瘤细胞增殖活性。有学者从无梗五加叶醇提物中分离得到五种3,4-裂环羽扇豆烷类化合物，且五种化合物对肿瘤细胞均具有良好的细胞毒性，其中以sessiligenin的细胞毒性最佳。通过Western blot和qR T-PCR实验发现，sessiligenin的抑制肿瘤细胞的机制可能是通过控制多靶点抑制PI3K/AKT信号通路实现的[52]。通过建立H22小鼠移植瘤模型考察无梗五加叶提取物chiisanoside对荷瘤小鼠体内肿瘤的抑制作用，实验结果发现chiisanoside以剂量依赖性抑制肿瘤增长[53]。有研究表明，从无梗五加叶中分离得到的三萜类成分对人肝癌细胞（Hep G2）、人肺腺癌细胞（A549）和人胶质瘤细胞（LN229）均具有抗增殖活性[50]。
2.2.2 镇静催眠作用
研究表明部分草药可以减少睡眠潜伏期并增加睡眠质量[54]。有学者对无梗五加叶的醇提物和水提物进行研究，发现其具有良好的镇静催眠活性[38]。通过动物实验发现，无梗五加叶能够以剂量依赖的方式降低睡眠潜伏期，延长睡眠时间。其镇静催眠机制可能是通过5-羟色胺（5-HT）和γ-氨基丁酸（GABA）介导的[7]。
2.2.3 抗抑郁
抑郁障碍（也称抑郁症）是一种常见的精神障碍，涉及长时间情绪低落或失去快乐或对活动的兴趣[55]。研究发现，无梗五加叶的抗抑郁机制可能与BDNF/TrkB /NF-kB途径有关。通过强迫游泳试验和悬尾试验发现无梗五加叶提取物chiisanoside可改善抑郁模型小鼠的抑郁症状，其抗抑郁作用可能是通过改变动物行为、海马炎症、氧化应激和神经营养等途径实现的[56]。
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第三章 chiisanoside 吲哚和咪唑类衍生物制备 ................................ 40
3.1 实验材料 ...................... 40
3.2 合成路线 ...................................... 41
3.3 合成过程 ...................................... 43
第四章 chiisanoside 衍生物体外抗肿瘤活性评价及分子对接 ....... 63
4.1 chiisanoside 衍生物体外抗肿瘤活性评价 ...................... 63
4.2 基于分子对接技术 chiisanoside 衍生物抗肿瘤铁死亡通路分析 ................................... 66
4.3 小结 ............................ 68
结论 .................................... 69
第四章 chiisanoside衍生物体外抗肿瘤活性评价及分子对接
4.2 基于分子对接技术chiisanoside衍生物抗肿瘤铁死亡通路分析
4.2.1 分子前处理
将化合物5b和5c通过Kingdraw（v3.0）软件绘制结构后，导入到chem3D（v20.0）软件中进行处理，将其能量最小化并导出为mol2格式。从RSCB蛋白数据库（https://www.rcsb.org/）中下载铁死亡相关通路蛋白质晶体结构（PDBID：2nsu），并导入Pymol（v2.5.2）中删去配体与水分子，保留目标蛋白质的单体结构。
4.2.2 分子对接
将大分子受体蛋白2nsu导入到Autoduck Tools（v4.2.6）软件，添加极性氢和电荷后导出为PDBQT格式作为受体。分别将5b，5c的mol2结构导入Autoduck Tools 软件，设置化学键后导出为PDBQT格式作为配体。在 AutoGrid程序中创建蛋白质对接位点的三维空间盒子，根据靶蛋白设置Gridbox坐标及大小，最终选取自由结合能最低作为优势构象保存并导出为PDBQT格式。利用 OpenBabel（v2.3.1）将文件转化为PDB格式，将其导入Pymol（v2.5.2）中进行分子间作用力分析以及结构可视化。
药学论文参考
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结论
本文基于五环三萜类化合物在抗肿瘤应用中的广阔前景，得到如下结论：
1.基于质量标志物理论，对刺五加叶和无梗五加叶中的潜在质量标志物进行分析预测，将刺五加叶中的8种活性成分列为候选质量标志物；无梗五加叶中的2种活性成分作为无梗五加叶潜在的质量标志物；
2.利用网络药理学技术发现刺五加叶和无梗五加叶中的活性成分chiisanoside具有良好的抗肿瘤活性，可能与铁死亡有关；
3.以chiisanoside为骨架，设计合成17种chiisanoside衍生物，并且经过波谱等技术手段确证；
4.评价17种化合物细胞毒性，筛选出对五种人源癌细胞具有抑制增殖作用的优势化合物5b和5c进行分子对接研究，其结合能分别为-10.613kJ/mol和-10.368kJ/mol。
参考文献（略）