导语：本研究探讨动态力学刺激对SD幼鼠前脂肪细胞的活力、增殖、凋亡及肿瘤坏死因子（TNF-α）表达释放影响的研究，为推拿按摩治疗青少年单纯性肥胖和肥胖并发症的现代医学细胞生物学机制提供理论与实验依据。由本站硕士论文中心整理。
前言
青少年单纯性肥胖是常见的营养障碍性疾病，是由特定的生化因子所引起的一系列进食调控和能量代谢紊乱而导致的疾病，与遗传、环境、膳食结构等多种因素有关。随着经济的发展，人民生活水平的提高，青少年肥胖发病率的上升幅度令人担忧。多数肥胖青少年在成人后都将发展成为成年期肥胖，成为糖尿病、高血脂及心脑血管病等多种严重危害人体健康疾病的危险因子，不仅降低患者的生存质量，而且缩短其寿命[1]。
所以防治青少年肥胖已愈来愈为医学界所重视，已成为国内外学者不断探索的课题。长期以来，蓄积的脂肪组织被认为是一种不活跃的组织，然而近年来的研究表明[2]：在正常的成年个体中，脂肪组织内的脂肪细胞数目基本保持在一个相对稳定的范围内，脂肪细胞的增殖分化与衰老死亡处在一个动态的平衡中，而肥胖患者体内的这种平衡则被打乱，脂肪细胞或者异常增殖分化增多，或者衰老死亡减少，最终出现脂肪细胞数目增加和体积的增大，导致临床肥胖。脂肪细胞数目的增多一般是通过前脂肪细胞增殖与分化实现的，其数目的减少则是通过前脂肪细胞、脂肪细胞的凋亡及其它可能的机制（如脂肪细胞的去分化）实现，上述两种过程发生紊乱，均有可能导致肥胖症的发生。
最近研究还发现[3]，脂肪组织不仅是能量的储备器官，也是一个重要的内分泌器官，许多基因在脂肪组织特异性表达。脂肪细胞分泌的激素和细胞因子，一方面可以自分泌或旁分泌的形式来调控脂肪细胞的代谢，另一方面可以进入血液以内分泌信号方式发挥远距离调控作用，从而调控与能量平衡相关的全身性代谢活动。如这些生物活性物质合成分泌量的减少或增多，非正常的作用于中枢神经系统、免疫系统及内分泌器官，能够共同参与神经、内分泌、免疫网络和组织损伤介导肥胖并发症的发生。因此，有学者认为[4]：脂肪细胞在人体生长和发育的自我调节、整个机体能量平衡调节的生理机制中扮演着重要角色，它协助神经系统和其他内分泌器官维持着机体的内平衡。青少年单纯性肥胖发病机理的研究为现代治疗机理的研究提供了思路。目前，在诸多减肥措施中，推拿按摩减肥被认为是一种经济有效、无副作用、且有益健康的临床治疗方法。分析国内外相关文献报道，现代推拿减肥的研究模式主要采用人或动物整体研究的方式进行实验，疗效观察主要选择形体指标和脂代谢指标进行评判，治疗机理主要通过神经和神经-体液机制进行解释。
但从治疗学角度看，肥胖局部实施手法操作是推拿治疗的重要手段之一，而推拿按摩产生的力学刺激是直接作用于人体脂肪蓄积的特定部位，但直接观察受力脂肪细胞中活性物质释放量的改变，从分子生物学水平上观察推拿按摩的动态力学刺激对前脂肪细胞形态、活力、增殖与凋亡，细胞TNF-а表达释放的研究至今还未见报道。因此，本课题体外培养SD肥胖幼鼠的前脂肪细胞，从细胞生物力学角度，模拟推拿治疗之“按摩”手法的力学作用形式，对细胞实施不同频率的动态力学刺激，观察细胞形态学与生长活力变化，增殖指数与凋亡率变化，TNF-а表达释放的变化，并为推拿按摩治疗青少年单纯性肥胖和肥胖并发症的现代医学细胞生物学机制提供理论与实验依据。
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目录：
中文摘要 7-8
英文摘要 8
前言 9-11
正文 11-37
1 实验研究 11-18
1.1 材料 11-12
1.1.1 实验动物及主要培养用试剂 11
1.1.2 主要检测试剂及试剂盒 11
1.1.3 主要实验器材 11-12
1.2 前脂肪细胞培养方法 12-13
1.2.1 前脂肪细胞原代培养 12
1.2.2 前脂肪细胞传代培养 12-13
1.2.3 前脂肪细胞鉴定 13
1.2.3.1 油红O 工作液配制方法 13
1.2.3.2 油红O 染色方法 13
1.2.3.3 前脂肪细胞鉴定结果 13
1.3 前脂肪细胞动态力学刺激实验 13-14
1.3.1 前脂肪细胞在6 孔板上的接种培养及力学加载前处理 13-14
1.3.2 前脂肪细胞在24 孔板上的接种培养及力学加载前处理 14
1.3.3 实验设计及分组 14
1.4 指标检测 14-18
1.4.1 动态力学刺激对前脂肪细胞排列及形态变化的检测 14-15
1.4.2 动态力学刺激对前脂肪细胞生长活力的检测(MTT 比色法) 15
1.4.2.1 MTT 比色法检测原理 15
1.4.2.2 MTT 比色法检测方法 15
1.4.3 动态力学刺激对前脂肪细胞增殖活性(PI)及细胞凋亡率检测(采用流 式细胞仪 DNA 含量及细胞周期分析方法检测) 15-17
1.4.3.1 流式细胞仪(FCM)概况及检测原理 15-16
1.4.3.2 标本收集 16-17
1.4.4 不同频率动态力学刺激前脂肪细胞TNF α释放表达检测 17-18
1.4.4.1 ELISA 法检测原理 17
1.4.4.2 标本收集 17-18
1.5 结果观察及统计学处理 18
2. 结果 18-22
2.1 动态力学刺激对前脂肪细胞排列及形态变化的影响 18-19
2.2 动态力学刺激对前脂肪细胞生长活力的影响 19-20
2.3 动态力学刺激对前脂肪细胞增殖活性及细胞凋亡率的影响 20-21
2.4 动态力学刺激对前脂肪细胞 TNF-α 释放表达的影响 21-22
3. 讨论 22-32
3.1 传统医学对青少年单纯性肥胖的认识 22-23
3.2 现代医学对青少年单纯性肥胖的认识 23-24
3.3 推拿按摩治疗青少年单纯性肥胖症的机理探讨 24-26
3.4 推拿按摩治疗作用本质的物理学分析和细胞生物学实验方法选择 26-28
3.5 体外模拟推拿按摩不同频率动态力学刺激对前脂肪细胞生长活力的影响及意义 28-29
3.5.1 体外模拟推拿按摩不同频率动态力学刺激对前脂肪细胞生长活力的影响 28-29
3.5.2 体外模拟推拿按摩不同频率动态力学刺激对前脂肪细胞生长活力研究的意义 29
3.6 体外模拟推拿按摩不同动态力学刺激对前脂肪细胞的增殖及凋亡的影响及意义 29-30
3.6.1 体外模拟推拿按摩不同频率动态力学刺激对前脂肪细胞的增殖及凋亡的影响 29
3.6.2 体外模拟推拿按摩不同频率动态力学刺激对前脂肪细胞的增殖及凋亡的意义 29-30
3.7 体外模拟推拿按摩不同频率动态力学刺激对前脂肪细胞肿瘤坏死因子释放的影响及意义 30-32
3.7.1 体外模拟推拿按摩不同频率动态力学刺激对前脂肪细胞肿瘤坏死因子释放的影响 30-31
3.7.2 体外模拟推拿按摩不同频率动态力学刺激对前脂肪细胞肿瘤坏死因子释放研究的意义 31-32
......
附录二:脂肪细胞因子在单纯性肥胖中的研究进展(综述) 38-54
附录三:致谢 54-55
附录四:个人简历 55
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