第 1篇 前 言
组织工程血管的构建，常因种子细胞的来源和数量不足及缺乏有效细胞因子的调控而限制了它的开展及应用。胚胎干细胞的成功分离曾给组织工程血管研究带来了新的希望，但很快受到伦理的困扰而举步维艰；受到免疫排斥限制；IPS细胞的技术突破又一次给其研究注入了活力。因此，找到临床可用的种子细胞是亟待解决的课题。 血管支架的选择是组织工程血管研究的重要内容。胎儿脐带血管具有来源广泛、抗原性小、符合小口径血管的需要及分支少等许多优点，是组织工程血管支架材料的理想来源。但如何脱去细胞降低免疫排斥反应、保留无细胞组织基质的三维构型，促进细胞粘附或保留分化功能是该研究的难点。 本研究拟以人毛囊间充质干细胞和胎儿脐静脉内皮细胞分别作为血管平滑肌细胞和血管内皮细胞的种子细胞，以脱细胞的胎儿脐动脉为支架材料，进行体外构建小口径具有生物学功能的组织工程血管的研究，为新型自体血管替代物的来源开辟新的途径。
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第 2篇 文献综述
第 1章 组织工程血管的种子细胞
单独由内皮细胞所构建在没有中膜平滑肌细胞或外膜成纤维细胞的情况下的组织工程血管内膜结构较不稳定。在此基础上，Weinbeg 和 Bell 利用牛主动脉内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞构建了第一个组织工程血管[7]。Niklason 等人将平滑肌细胞种在 PGA 支架上构建组织工程血管，在力学作用下体外培养 8周[8]后发现该组织工程血管表现出的生理和机械功能与宿主血管相类似。但是，平滑肌细胞的寿命在一定程度上受限于供者的年龄，这使平滑肌细胞在体外不断的扩增培养过程中质量会逐渐下降[9， 10]。干细胞是一类能够自我更新的、具有高度增殖能力的、具有多向分化潜能的细胞类型。在合适的培养体系中，他们能够分化成组织特异的细胞类型用于以细胞为基础的组织工程和细胞治疗，更能够用于基因治疗，为组织的修复和重建提供了理论的可靠性[11-13]。根据干细胞的发育阶段不同可以分为胚胎干细胞和成体干细胞[14]。根据分化能力的不同可以分为：全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。根据内在属性和临床应用潜力，胚胎干细胞和成体干细胞受到极大的关注。
第 2章 组织工程血管的支架材料
过去用于组织工程的构建的支架材料：天然的生物支架材料和人工合成的、可生物降解的支架材料。天然的生物支架的材料有很多，例如胶原、透明质酸、脱乙酰壳聚糖等。Ⅰ型胶原的应用，主要是因为其具有良好的生物降解性、较低的抗原性、能促进细胞的增殖等特性[53，54]。壳聚糖的应用是因为其具有较好的溶解性、无刺激性及可塑性[55，56]。透明质酸因为其降解物可以促进创面的愈合及较好的生物相容性而被使用。人工合成可生物降解材料，如聚氨基甲酸乙酯、多聚乳酸、多聚乙醇酸及聚己内酯等曾作为支架材料，这些支架材料的特点是降解速度是可调控性，可大量的生产。
第2 篇 文献综述 ....................... 3
第1 章 组织工程血管的种子细胞 .......................... 4
第2 章 组织工程血管的支架材料 ........................ 8
第3 篇 实验研究 .................... 15
第1 章 人毛囊间充质干细胞的分离培养及细胞生物学特性 ...... 15
第2 章 脱细胞动脉支架的制备及理化特性 ......................... 41
2.1 胎儿脐动脉的分离及脱细胞动脉支架的制备 ..................... 41
第4 篇 结 论 ................................... 65
课题创新性总结 .......................... 65
第 3篇 实验研究
第 1 章 人毛囊间充质干细胞的分离培养及细胞生物学特性
组织工程血管构建的种子细胞的另一个重要的细胞成分：内皮细胞。虽然说具有活性的内皮细胞有多种来源，但仍然比较困难。大量的研究的失败，特别是小口径血管的失败，主要是由于管腔内无内皮细胞或内皮细胞功能受损所致。那么，在组织的何处获得以及如何获得大量的具有正常功能的内皮细胞已成为构建组织工程血管的关键。至今为止已经成功分离得到内皮细胞的来源主要有以下几种：①成熟血管内皮细胞自体或异体的血管是成熟血管内皮细胞的来源之一。组织工程的最初设想是切取一小段自体血管，分离扩增血管内皮细胞后，构建一条更长的血管。但研究发现，这种方法获得的血管壁内皮细胞绝大部分为终末分化细胞，体外传代5-8代后很快发生老化，失去增殖能力；同时，扩增的内皮细胞是否仍然具有正常的功能尚无定论[91， 92]。
第 2章 脱细胞动脉支架的制备及理化特性
胎儿脐动脉的分离方法如 1.4.2.1 所示。脱细胞脐动脉的制备的方法为用磷酸盐缓冲液（PBS）配制的浓度为 0.25%的胰蛋白酶和 0.02%的乙二胺四乙酸(EDTA)的消化液。将脐动脉的两端与蠕动泵的链接管相连接，蠕动泵的链接管事先经多聚甲醛粉末密闭熏蒸消毒 2天。分别使用0.25%的胰蛋白酶和 0.02%的乙二胺四乙酸(EDTA)的消化液以及 10%SDS持续灌流，取出支架，用大量的 PBS冲洗管腔的内、外两侧，-20°C保存备用。
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第 4篇 结 论
1. 建立了稳定、高效的人毛囊间充质干细胞分离培养以及扩增的技术体系，首次对人毛囊间充质干细胞进行了成脂、成骨、成软骨、成肌等多向分化潜能的技术鉴定，同时分离得到了胎儿脐静脉来源的内皮细胞。 2. 通过脱细胞方法获取的脱细胞血管支架，细胞外基质结构仍然保持完整，符合组织工程血管支架材料的生物学及生物力学要求，具有很好的组织相容性和安全性，能为组织工程的种子细胞提供良好的空间结构。 3. 以人毛囊间充质干细胞为种子细胞和以脱细胞脐动脉为支架材料构建的组织工程血管，在组织结构、生理功能和生物化学活性与自然血管十分接近。为后续的动物移植实验打下了坚实的基础。
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参考文献（略）