本文是一篇药学论文，为了进一步探究冻干工艺中不同因素对珠子参皂苷的影响，以及优选出最佳的真空冷冻干燥工艺参数，本实验以人参皂苷Ro和竹节参皂苷IVa两种皂苷的含量为评价指标，在单因素实验的基础上，采用中心组合设计（CCD）结合响应面进行分析，优选出珠子参最佳的真空冷冻干燥工艺，为珠子参的质量评价研究和炮制工艺以及临床应用提供理论参考和实践指导。
第一章 绪论
1.1珠子参研究现状
1.1.1概述
珠子参为五加科植物珠子参Panax japonicus C.A. Mey. var. major C. Y. Wu et K. M. Feng 或羽叶三七 Panax japonicas C. A. Mey. var. bipinnatifidus(Seem.) C. Y. Wu et K. M. Feng 的干燥根茎。具有补肺养阴、祛瘀止痛、止血的作用止咳、祛痰、强壮和滋补的作用[1]。药理研究表明珠子参具有抗炎[2]、抗氧化应激损伤[3]、增强免疫力[4]、抗肿瘤[5]保护心脑血管和神经系统[5]等功效。目前研究对于珠子参的各个部位的化学成分都有涉及，但主要集中于皂苷类成分的研究，三萜类的皂苷是珠子参中最主要的活性成分，除此之外，珠子参中也含有多种非皂苷类成分如挥发油、多糖、微量元素、氨基酸及蛋白质等[6]。因其富含对人体健康有益的生物活性成分人参皂甙，珠子参还可用作膳食补充剂[7]。
珠子参的主要药用部位为主根，其形状呈球形，与根茎之间相互连接，形如一串圆珠链，由此将其取名为珠子参。中国科学院昆明植物研究所在上世纪末期将珠子参认定为是竹节参的变种[13]。珠子参分布于我国多个省份，而主产地为云南[8]。目前，珠子参具有很高的药用价值，自古以来在我国民间就被广泛使用，但珠子参的生长非常缓慢，在野外生长稀少，再加之人们的过渡采摘，虽然目前已有珠子参人栽培，但药材资源仍然稀少，并且价格昂贵[8]。
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1.2真空冷冻干燥技术及其在中药材方面的应用
1.2.1真空冷冻干燥技术概述
冷冻干燥是一种以冰的升华为除水机理的低温脱水过程。这段升华的过程可以在真空(真空冷冻干燥，VFD)或大气压(大气冷冻干燥，AFD)下进行，因为驱动力是样品和冻干装置内部空间之间的蒸气压力梯度，而不是系统中的绝对压力。与高温干燥过程相比，冷冻干燥更昂贵，主要是由于所需的设备和操作的持续时间。这个干燥过程主要包括，样品首先进行预冻处理，然后在真空过程中通过升华去除样品内部的结晶水，然后通过冰升华使样品脱水[25]。通过这种低温干燥的方式，通常可以使获得的最终产品质量得到提升，从而使该加工方法在制药领域特也受到广泛的欢迎。对于一些高价值的食品和中药材，由于采收期和产地的限制、容易腐烂变质和营养含量或药用价值加高。该方法可以很好地保留其有效成分，提高产品的营养或药用价值。该技术与其他传统的加工方法相比具有很多的优势:在产品加工过程中，营养物质或者有效成分经过高温会被分解，使得产品质量下降，而冻干的产品营养价值和药用价值相比于传统的加工方法都较高；有些产品由于自身性质，极易受潮或氧化变质，导致其不能长期保存，而冻干技术能够去除产品中的结晶水和结合水，使产品不易受潮氧化变质，延长产品的贮存期限；冻干技术能较好的保留产品的外观颜色气味，以及内部结构；能够避免产品在冻干过程中混入杂质或者有害物质[27-29] 。
对于真空冷冻干燥过程，设备和样品之间的热交换可能会受到低压的影响，特别是冻干机加隔板和其上的样品之间的传导。其中，最重要的是搁板温度和腔室内的真空度，会影响工艺速度和最终产品质量。产品温度、腔室内的真空度在实际的干燥过程中是对样品成分含量的变化影响较大的因素。在进行真空冷冻干燥工艺研究中，应进一步研究，针对不同的化合物可能会受到的压力和温度的影，然后选择和设计最合适的处理条件。
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第二章 不同炮制方法的珠子参质量与体外抗凝作用比较
2.1实验材料与试剂
2.1.1实验动物
SPF级雄性昆明小鼠（18-20 g），购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号SCXK（湘）2019-0004。
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2.2实验方法
2.2.1珠子参不同炮制品的制备
取新鲜的珠子参清洗，去根，切片，混匀后分成6份，分别进行晒干、阴干、热风干燥、蒸制、煮制、真空冷冻干燥。晒干：取新鲜珠子参片，均匀平铺于样品盘中，置于充足阳光下进行自然干燥，直至足干。阴干：取新鲜珠子参片，均匀平铺于样品盘中，置于阴凉通风处进行阴干，直至足干。热风干燥：取新鲜珠子参片，均匀平铺于样品盘中，置于恒温鼓风干燥箱40 ℃进行烘干，直至足干。蒸制：取新鲜珠子参片，均匀平铺于蒸锅内，蒸制1 h,然后置于恒温鼓风干燥箱40 ℃进行烘干，直至足干。煮制：取新鲜珠子参片，待锅内水沸腾，放入锅中，煮制1 h, 然后置于恒温鼓风干燥箱40 ℃进行烘干，直至足干。真空冷冻干燥：取新鲜珠子参片，并平铺于物料盘中，真空度为60.00 Pa，隔板温度为50 ℃进行真空冷冻干燥，直至足干。
2.2.2珠子参不同炮制品的感官评价及SEM表征
采用扫描电子显微镜(SEM)对优化工艺下制备的真空冷冻干燥珠子参样品和不同炮制方法处理的珠子参及新鲜珠子参的外观以及微观形态结构进行观察。
2.2.3珠子参皂苷成分含量测定方法的建立
2.2.3.1对照品溶液配制
精密称取竹节参皂苷IVa标准品0.8 mg，人参皂苷Ro标准品1.1 mg，制成浓度为0.8 mg/ml、1.1 mg/ml 含有60 %乙醇的混合对照品溶液。
2.2.3.2供试品溶液配制
精密称取珠子参供试品粉末0.1 g置于50 mL离心管中，加入60 %乙醇超声30 min，离心取上清，取滤渣重复上述提取步骤一次，合并滤液，将滤液置于25 mL容量瓶中，定容。溶液过0.22 μm微孔滤膜，制得供试品溶液。
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第三章 珠子参真空冷冻干燥工艺优化......................................... 21
3.1仪器与材料 ......................................... 21
3.1.1实验试剂 ...................................... 21
3.1.2仪器 ........................................... 22
第四章 珠子参（冻干粉）质量标准研究............................ 29
4.1实验材料与试剂 ................................... 30
4.1.1实验材料 ....................................... 30
4.1.2实验试剂 ....................................... 30
第五章 基于PI3K/AKT通路研究珠子参（冻干粉）对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响............................. 37
5.1实验动物 ................................ 38
5.2材料与试剂 ....................................... 38
5.3实验仪器 .................................... 39
第六章 珠子参（冻干粉）对脑缺血再灌注损伤大鼠血浆代谢组学的影响
6.1材料与试剂
6.1.1实验样本
取“5.9.1”项下采集的血浆样本，分组见表6.1。
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第七章 结论与展望
7.1结论
珠子参作为与人参、三七、西洋参等同属于人参属的稀贵药材，同样以皂苷为主要有效成分，在我国在古以来人们就用其入药，来治疗疾病。2020版《中国药典》中记载，其性微寒苦甘，归肝、肺、胃经，具有补肺养阴、祛瘀止痛、止血的作用。现代药理学研究也证明珠子参具有抗炎、抗氧化应激损伤、增强免疫力、抗肿瘤、保护心脑血管和神经系统等功效。但由于珠子参大多采集于野外，药材资源日渐枯竭，国内近年来才开始对珠子参进行人工种植和驯化，随着人工栽培面积的不断扩大，产地加工技术缺乏成为制约产业发展的瓶颈。近10年来，珠子参在药化、药理及分子鉴定方面开展了较多研究，但在产地加工方面报道较少。因此，为了评价真空冷冻干燥珠子参的质量及生物活性，本论文主要通过有效成分的测定，对不同炮制方法处理的珠子参皂苷含量进行比较，选出了最佳炮制方法为真空冷冻干燥，对珠子参真空冷冻干燥工艺参数进行了优化，找到了最佳工艺参数，通过成分、药效、代谢组学为切入点，对真空冷冻干燥珠子参进行综合评价，为珠子参的真空冷冻干燥提高理论参考和实践指导。并通过对珠子参冻切片质量标准的制定，为珠子参的规范化加工提供科学依据。
为了比较珠子参不同炮制品的质量与抗凝活性，从而优选出来优选出针对体外抗凝效用以质量较好的珠子参炮制方法，本论文首先通过采用SEM表征和外观颜色形态进行观察以及皂苷含量的测定并比较了珠子参不同炮制品的质量；然后再采用体外抗凝血实验考察了珠子参不同炮制品的抗凝血活性。结果显示，新鲜样品与其经过炮制后的样品具有显著的差异，相较于其他炮制方法真空冷冻方法处理的珠子参饮片颜色与显微结构更接近于新鲜珠子参；在比较6种不同的炮制方法处理后的珠子参中的人参皂苷Ro和竹节参皂苷IVa含量结果显示，采用不同炮制方法处理的珠子参中两种皂苷的含量差异较大，相较于其他炮制方法，真空冷冻干燥处理的珠子参样品中人参皂苷Ro、竹节参皂苷IVa含量最高，分别为5.28%、3.11%，两种皂苷含量总和为8.39%。
参考文献（略）