本文是一篇药学论文,本研究成功制备性质稳定的TQ-PEG-LPs,其具有较强的抗BALB/c小鼠乳腺癌的作用,是一种安全、有效的TQ纳米制剂。
第一章百里醌脂质体的处方前研究
1前言
处方前研究是开展药物剂型设计的重要环节,药物的理化性质对药物剂型的选择、制备方法以及体内生物利用度有着重要影响。处方前研究通过借助相关仪器对药物进行理化性质的分析,从而了解药物的有关性质。高效液相色谱法作为一种常用的仪器分析方法,可以对待测样品进行分析测定,且专属性好,准确度高。据此我们建立了百里醌含量测定的HPLC方法,并对专属性、精密度、准确度、线性范围、稳定性等指标进行了验证。随后利用该分析方法对百里醌在不同溶剂中的溶解度进行测定,为后续剂型的制备以及体外释放奠定基础。
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2材料与方法
2.1主要试剂和仪器
2.1.1主要试剂
百里醌(源叶生物科技有限公司;上海)大豆卵磷脂(艾伟拓医药科技有限公司;上海)胆固醇(毕得医药)
DSPE-PEG2000(LIPOID GMBH)氯仿(国药集团化学试剂有限公司)磷酸(恒兴化学试剂制造有限公司,天津)甲醇(禹王和天下新材料有限公司;山东)吐温-80(恒兴化学试剂制造有限公司;天津)
2.1.2主要仪器
ME-204电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司;上海)KQ-250E超声波清洗器(超声仪器有限公司;昆山)SHZ-Ⅲ循环水真空泵(亚荣生化仪器厂;上海)N-1100旋转蒸发仪(爱朗仪器有限公司;上海)DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器(秋佐科学仪器有限公司;上海)Scientz-ⅡD超声波细胞粉碎机(新芝生物科技股份有限公司;宁波)SIGMA台式冷冻离心机(博励行仪器有限公司;北京)Waters2695高效液相色谱仪(Waters公司)TU-1901双光束紫外可见分光光度计(普析仪器有限公司;北京)1mL一次性注射器(悦康医疗器材有限公司;常州)
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第二章百里醌PEG化脂质体的制备及其质量评价
3结果
3.1 TQ-PEG-LPs的包封率和载药量的测定方法
3.1.1离心速度的筛选
结果表明,在离心10 min条件下,离心速度超过8000 rpm时,分离度有所下降,故选择8000 rpm为离心转速,结果见表2.2。
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3.2 TQ-LPs制备方法的筛选
在制备方法筛选上,脂溶性药物采用被动载药的制备方法,最常用的被动载药方法有薄膜分散法和注入法。结果表明乙醇注入法制得的脂质体包封率略低于薄膜分散法,且操作不太好控制,重复性较差。因此,后续实验选择薄膜分散法制备TQ-PEG-LPs。结果见表2.5。
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第三章 TQ-PEG-LPs的体内抗肿瘤作用研究 ..................................... 37
1 前言 .......................... 37
2 材料与方法 ........................................... 38
2.1 仪器、试剂与细胞 ......................... 38
2.2 生物样品来源 ....................... 39
结论 ..................................... 44
3结果
3.1 TQ-PEG-LPs的体内抗肿瘤作用
按上述实验方法,荷瘤小鼠给药20天后,对给药组和对照组的肿瘤重量进行单因素方差分析和多重比较检验。结果如下图3.1。
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从A图可以看出,与TQ原料药和TQ-LPs组比较,TQ-PEG-LPs组肿瘤体积更小,抑制肿瘤的效果更明显。由C图可以看出,与葡萄糖对照组比较,TQ原料药、TQ-LPs、TQ-PEG-LPs对小鼠肿瘤的生长均有显著抑制作用(P<0.01)。研究发现TQ-PEG-LPs组与TQ-LPs组间的差异(P<0.05)不如TQ-PEG-LPs组与TQ原料药组间的差异(P<0.01)明显。葡萄糖组、TQ原料药组、TQ-LPs组、TQ-PEG-LPs组的肿瘤重量分别为1.03±0.08g、0.74±0.06g、0.64±0.10g、0.51±0.06g。B图可以看出对照组、TQ原料药组、TQ-LPs组和TQ-PEG-LPs组没有明显体重变化。TQ原料药组、TQ-LPs组和TQ-PEG-LPs组的抑瘤率分别是28.16%、37.86%、50.49%。
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结论
本文以黑种草籽主要成分百里醌为研究药物,以大豆卵磷脂、胆固醇为主要脂质材料,脂质体表面修饰DSPE-PEG2000,采用薄膜分散法制备TQ-PEG-LPs。对制剂进行处方筛选、工艺优化、质量评价以及体内抗肿瘤药效考察,为TQ的临床应用提供了剂型选择。
(1)本文通过单因素筛选结合Box-Behnken响应面法优化得最佳TQ-LPs的处方:大豆卵磷脂与胆固醇的质量比为7:1;药脂比为1:10;磷脂浓度为13 mg/mL。加DSPE-PEG2000修饰TQ-LPs后,脂质体粒径变小、PDI变小、Zeta绝对值变大,更稳定。TQ-PEG-LPs的最优处方和制备工艺为:TQ 9.1 mg,大豆卵磷脂91 mg、胆固醇13 mg、DSPE-PEG200011.3 mg,有机相与水相的比例为1:7,PBS溶液的pH为6.6,旋蒸水浴温度控制在40℃,超声破碎功率为300 W,破碎时间为15 min。
(2)TQ-PEG-LPs的外观是略带蓝色乳光的淡黄色混悬液,包封率为(87.12±1.02)%,载药量为(2.97±0.25)%,粒径为(102.2±0.4)nm,PDI为(0.213±0.003),Zeta电位为(-35.54±0.20)mV ;制备工艺稳定,重复性良好。TQ-PEG-LPs在粒径大小、稳定性方面比TQ-LPs更具有优势,储存稳定性结果表明,TQ-PEG-LPs在4℃环境下储存4周比较稳定。体外释放结果表明,TQ在脂质体中呈缓慢释放的状态。TQ红外光谱扫描结果表明,在TQ-PEG-LPs制备过程中TQ的化学结构没有发生变化。
参考文献(略)