桩蛋白对于口腔磷状细胞癌之表达及生物学意义探讨

第 1 章 引 言

口腔鳞状细胞癌 OSCC（Oral squamous cell carcinoma）是最罕见的，口腔恶性肿瘤，均匀每年发病率 405000 人，逝世亡 211000 人[1]，40-60 岁为该病的高发病年纪组，因口腔的特别解剖构造及复杂的毗连关系，肿瘤被发明时，常已经累积双侧，并且约 1/3 的患者发作了颈淋巴结转移[2-4],招致了预后不良。目前口腔鳞状细胞癌的医治以内科手术切除为主，配合术前的辅佐医治或引诱化疗，术后喷射医治和化学药物医治为辅，然而关于年纪较大体质较弱的患者群，或是有全身严重病患，不能耐受手术的患者，目前仍无有效的医治办法，因而，从该疾病发作的分子机制来充足熟悉，寻觅一种新的医治门路可以晚期的在基因水温和分子程度上得到有效的医治显的非常必要。
桩蛋白（paxillin）是一种黏着斑相关蛋白, 也是一种信号接合蛋白，其序列高度保守，分布于黏着斑，构成黏着斑的纽带，通过细胞外基质蛋白和层黏蛋白的接合进行信号传导，使肿瘤细胞获得迁移和侵袭的能力。所以 pax illin 与肿瘤细胞的浸润和转移必定存在着某种联系。
本课题的目的是通过研究 paxillin 在口腔鳞状细胞癌中的表达，探讨paxillin 在口腔鳞状细胞癌中的作用。应用免疫组化技术检测 186 例吉林大学口腔医院颌面外科 2005 年 1 月—2010 年 1 月手术切除的口腔鳞状细胞癌住院患者的病理标本（这些患者术前未接受过放化疗），和 53 例正常口腔黏膜鳞状上皮作为实验对照组，口腔鳞状细胞癌颈部转移淋巴结 73例，未转移淋巴结 113 例，所有患者平均年龄 54.3 岁。结果：口腔鳞状细胞癌组织中 paxillin 蛋白表达水平显著高于正常口腔鳞状上皮（p<0.05）。并且随着肿瘤病理分级的降低 paxillin 蛋白表达有升高趋势（p<0.05）。paxillin 蛋白在有淋巴结转移的口腔鳞状细胞癌组织中的表达显著高于无淋巴结转移组（p<0.01）。paxillin 蛋白的表达与患者的年龄、性别及肿瘤的生长部位无明显相关（p>0.05）。结论：paxillin 蛋白的阳性表达与口腔鳞状细胞癌组织的病理分级、颈部淋巴结转移存在显著相关性，其在在口腔鳞状细胞癌异常表达提示着肿瘤预后不良，反映了肿瘤的恶性程度，有助于及早诊断出口腔鳞状细胞癌的恶性程度，并且可以作为判断淋巴结转移的指标。

第 2 章 文献综述

Paxillin 及其在肿瘤转移中的作用的研究进展Paxillin是一种衔接蛋白，主要存在于细胞质内的黏附班内，黏着斑是细胞与胞外基质(ECM ) 的接触点,构成ECM与细胞骨架联系纽带, 也是信号转导的主要部位, 促进信号从胞外基质经整合素途径向细胞内传递[6]。Paxillin做为黏附班的重要组成部分，参与动态调节黏着斑、整合蛋白介导的信号转导和黏着斑的组装，调节细胞的移动和播散等功能[5,7,8].研究发现paxillin广泛存在于人体正常组织中，但是在神经组织及血小板中的含量极低或缺乏，Paxillin的正常表达是细胞正常增殖、分化、粘附和正常细胞信息传导所必需的,当其表达下降或缺如是表示细胞的黏附力下降 。因此paxillin与肿瘤的侵润与转移存在着必然的联系。
2.1 paxillin 的生物学特性
2.1.1 paxillin 的结构Paxillin蛋白质最早发现是在鸡的砂囊的平滑肌组织中，命名为paxillin意思为“树桩”，分子量为68×103的磷酸蛋白，基因编码约559个氨基酸，人类paxillin基因定位于染色体12q24，有11个外显子。其氨基酸端有俩个不同的蛋白质结构域，分别是LD结构域和富含脯氨酸的LIM结构域，LD由5个模体组成，主要功能是识别蛋白质。LD结构序列高度保守，5个共有序列是LDXLLXXL[12].但是它们提供蛋白质特异相互作用界面，LD2与黏着斑蛋白和FAK/pyk2结合，LD1与整合蛋白偶联激酶，黏着斑蛋白和乳头瘤病毒E6蛋白的互相作用。羧基端是由4个LIM结构组成，其功能是介绍导蛋白质之间的互相作用[11]。每个LIM结构是由疏水力结合在一起的俩个锌指模体，每个锌指有2个反向的 片层，片层中间隔着一个转角[13]，相邻的LIM结构可以协同调节蛋白质结合和细胞定位，例如LIM可以介导糖皮质激素、微管蛋白（tubulin）、雄性激素以及PEST(protein tyrosine phosphatase)等。整个分子中还散布着一些酪氨基、丝氨酸、苏氨基的磷酸化位点构成细胞信号传导的关键部位。

2.2 Paxillin 的磷酸化
2.2.1 酪氨酸的磷酸化研究发现
paxillin存在6个潜在的酪氨酸磷酸化位点，分别是Y31Y40Y118Y181Y434Y488[14],Paxillin的酪氨基酸磷酸化后，可以调节细胞骨架，还可以产生SH2结构，同时接头蛋白CRK的SH2结合序列与paxillin的TYR31和tyr118的序列一致，因此二者可以结合酪氨酸磷酸化后激活RAS途径。此外免疫球蛋白E（Ige）、T细胞受体、单核细胞趋化蛋白（HGF）、表皮生长因子(EGF) 血管内皮生长因子（VEGF） 肝细胞生长因子（HGF）青灰因子（steel factor） 胰岛素样生长因子1(IGF-1)等都能引发Paxillin的酪氨酸磷酸化。
2.2.2 丝氨酸和苏氨酸磷酸化
paxillin的羧基端LIM2 和LIM3内存在特异的丝氨酸/苏氨酸磷酸化位点，通过病毒感染、肌肉收缩、EGF、白细胞介素-3 等介导出现Paxillin的丝氨酸/苏氨酸磷酸化。

2.3 paxilln
于细胞运动和肿瘤转移Paxillin参与蛋白介导的信号传导，与FAK、CRK 相关底物激活整合蛋白，也使FAK酪氨酸磷酸化，激活RAS途径，促进信号从ECM向细胞内传递。Paxillin作为细胞移动中的多条信号途径的“中转站”，影响着细胞运动，也参与了肿瘤的浸润及转移。已经有研究表明，当Paxillinde 的表达缺乏或是低下时，细胞形态变圆，细胞黏附能力下降，影响细胞丝状伪足形成，在培养基中的扩散能力缺乏[15].该基因缺失的成纤维细胞表现为细胞迁移能力缺失，这表明paxillin具有控制细胞播散和移动的能力[16].petie等[17]研究发现，如果吧paxillin分子中的酪氨酸Y31,Y118变成苯丙氨酸在细胞中过度表达，则可以抑制细胞运动。细胞运动还受桩蛋白丝氨酸磷酸化的调节，有研究表明，把paxillinde 178位丝氨酸S178突变为甘氨酸并在细胞中表达，细胞运动会受到明显限制[19]。还有实验证明了肝细胞生长因子促进上皮细胞铺展和迁移的过程是通过细胞外信号调节酶（ERK）磷酸化paxillin的S83实现的[18]。

目录
第 2 章 文献综述....................................3
2.1 paxillin 的生物学特性............................ 3
2.1.1 paxillin 的结构................................ 3
2.2 Paxillin 的磷酸化............................... 4
2.2.1 酪氨酸的磷酸化 ................................ 4
第 3 章 实验材料与方法................................8
3.1 主要试剂 ......................................... 8
3.2 实验仪器 ......................................... 8
3.3 病例选择及临床病理资料 ............................ 9
3.4 实验方法 .......................................... 9
第 4 章 实验结果........................................12
4.1 paxillin 镜检结果及阳性率表达..........................12
4.2 Paxillin 的表达情况与肿瘤恶性程度的关系 ............ 12

结 论
1.paxillin 蛋白在口腔鳞状细胞癌中的异常高表达，与正常口腔黏膜细胞中的表达比较 p＜0.05 ，说明 paxillin 参与了口腔鳞状细胞的发生。
2.paxillin 蛋白在口腔鳞状细胞癌的病理分级表达中，随着分级程度减低，paxillin1 的表达升高。（p＜0.05) 说明 paxillin 高表达提示癌症恶性程度高。
3.Paxillin 在口腔鳞状细胞癌转移淋巴结阳性表达超过总例数的 2/3。未转移淋巴结中阳性表达率为 46.01%.俩者比较有统计学意义 p＜0.05.说明 paxillin 于淋巴结转移密切相关。
4.paxillin 蛋白在口腔鳞状细胞癌组织的表达与患者的性别、年龄、肿瘤部位无关（p>0.05）；
5.paxillin 蛋白作为一个新发现的与肿瘤转移相关的蛋白，有望成为判断肿瘤预后的新指标和未来治疗肿瘤转移的一个靶点。

参考文献
[1] Chu Chen,Eduardo Mendez,John Houck,Wenhong Fan et al.GeneExpression Profiling Identifies Genes Predictive of Oral Squamous CellCarcinoma.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2008;17(8).
[2] 邱蔚六 张震康 主编，口腔颌面外科学 .第 5 版.北京：北京人民出版社，2003,259-263
[3] Nason RW etal AM .J.Surgery 1989,158:292 4 Helfrich GB Am Surgery1971,122:48
[5] 刘长锁，陈乃宏。 桩蛋白的结构与功能[J].生命的化学，2005,25（3）:208-210
[6] Clark EA, Brugge JS. Integrins and signal transduction pathways: the roadtaken. Science.1995，268: 233-239.
[7] Turner, CE. Paxillin interactions [J].http://sblunwen.com/kqyx/ Cell Sci. 2000, 113:4139-4140.
[8] Turner CE. Molecules in focus Paxillin [J].Cell Biol.1998，30(9):955-959。
[9] Turner CE. Molecules in focus paxillin [J].Int Biochem cell Biol,1998:30(9): 955-959
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