本文是一篇医学论文，本研究通过体外培养慢性髓系白血病K562细胞系，分别用不同浓度的氟马替尼、地西他滨、三氧化二砷、维奈托克处理细胞，CCK-8法检测单药及两药分别联合对CML细胞增殖的影响，并利用Compsyn软件计算两药联合作用的联合指数。
材料与方法
1材料
1.1细胞株
人CML细胞株K562购自美国模式培养物集存库（american type culturecollection,ATCC）。培养条件为:含10%胎牛血清及青霉素、链霉素（各100 U/mL ）的RPMI-1640培养基，37℃、5%CO2的恒温培养箱培养，取对数生长期细胞进行实验。
1.2主要药品及配制
氟马替尼（flumatinib，HH-GV-678）：粉剂，购自MCE，货号HY-13904-5mg，分子量562.59，二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）配成5 mmol/L浓度的母液，分装于2 ml离心管中，贮存于-80℃，使用时药物避免反复冻融，每次使用前用含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养液稀释至工作浓度，控制DMSO在培养液中的浓度在1%以内。地
西他滨（decitabine，DAC）：粉剂，正大天晴药业集团股份有限公司产品（商品名：晴唯可），分子量228.21，规格10 mg，用磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffersaline,PBS）配成1 mmol/L浓度的母液，分装于2 ml离心管中，贮存于-80℃，使用时药物避免反复冻融，每次使用前用含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养液稀释至工作浓度。
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2实验方法
2.1细胞培养细胞复苏
1）超净台中放入15 ml离心管、3 ml吸管、细胞培养瓶、移液枪等实验用品后紫外线照射30min；
2）水浴锅加热至37℃，预先在15 ml离心管中加入含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养基5 ml；
3）从液氮中取出实验细胞株，迅速将其置于37℃水浴锅中解冻，同时晃动，动作轻缓以免细胞损伤；
4）用移液枪将细胞悬液转移至预先加好完全培养基的15 ml离心管中，注意缓慢滴加，然后轻轻吹打细胞，以免损伤细胞，操作完毕后放入水平台式离心机离心（1000 rpm×5 min）；
5）弃上清，并向离心管内加入5 ml新鲜的含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养基，轻轻吹打细胞使之重悬；
6）将细胞悬液转移至细胞培养瓶中，置于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养，12小时后将细胞换液。
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结果
1不同靶点对慢性髓系白血病细胞增殖的影响
1.1氟马替尼单药对CML细胞的增殖影响
终浓度为0.5 nmol/L、1 nmol/L、2.5 nmol/L、5 nmol/L、10 nmol/L的氟马替尼分别处理K562细胞48h后，与不加药的对照组相比，不同浓度的氟马替尼对K562细胞的增殖均有一定的抑制作用，且抑制作用呈浓度依赖性，实验组依次与对照组比较，差异均具有统计学意义(P＜0.001)。由此计算出氟马替尼处理K562细胞的半数抑制浓度（IC50值）为4.939 nmol/L（95%CI：4.055-6.232 nmol/L）。依据上述结果，考虑氟马替尼效果显著，选定0.5 nmol/L的氟马替尼作为两药联合作用时的用药浓度（见图3和表17）。
医学论文怎么写
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2联合用药对慢性髓系白血病细胞增殖的影响
2.1氟马替尼分别联合其他三种药物对CML细胞的增殖影响
在两药联合处理K562细胞48h后，与0.5 nmol/L的氟马替尼单药相比，0.5nmol/L的氟马替尼联合50μmol/L的地西他滨对K562细胞的增殖抑制作用显著增强，差异具有统计学意义（P＜0.001），提示两药联合具有协同作用；0.5 nmol/L的氟马替尼联合2μmol/L的三氧化二砷对K562细胞的增殖抑制作用明显增强，差异具有统计学意义（P＜0.01），提示两药联合具有协同作用；而0.5 nmol/L的氟马替尼联合10 nmol/L的维奈托克对K562细胞的增殖抑制作用非但没有增强，反而有增强K562细胞增殖的趋势，且差异具有统计学意义（P＜0.01）（见图7和表21）。
医学论文参考
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第二部分 多靶点联合用药治疗CML的初步探索性研究 ................. 34
材料与方法 ...................... 34
结果 ................................ 42
讨论 ................................. 51
结论 ...................................... 56
讨论
95%以上的CML患者可通过染色体显带技术或FISH技术检测到费城（Ph）染色体，该异常染色体在分子水平上形成t（9；22）（q34;q11），即BCR-ABL1融合基因，其编码的蛋白产物具有增强的酪氨酸激酶活性，通过激活其下游一系列信号途径，干扰造血干细胞的细胞增生及凋亡，从而导致造血干细胞恶性增殖，进而引起CML的发生。由于断裂点（break point）及融合位点的不同，产生不同类型的融合蛋白，主要包括3种融合蛋白：分子量为190KD的p190蛋白、分子量为210KD的p210蛋白、分子量为230KD的p230蛋白。p210蛋白见于大多数典型的CML和少部分Ph+的急性淋巴细胞白血病，与正常的ABL蛋白相比，p210有更强的酪氨酸蛋白激酶活性，在体外能使造血祖细胞转化。p190通常在Ph+的急性淋巴细胞白血病的患者中出现，p190比p210蛋白具有更强的酪氨酸激酶活性，具有更高的癌基因的潜能，可导致急性白血病。表达p230蛋白的患者多具有显著的中性粒细胞成熟和血小板增多。在上世纪之前，CML的主要治疗方法包括化疗、α干扰素、造血干细胞移植，对CML发病机制及其涉及的信号通路的研究不断深入，通过广泛筛选、研究小分子化合物，针对BCR-ABL酪氨酸激酶活性甲磺酸伊马替尼的问世，标志着CML的治疗进入靶向治疗的新纪元，彻底改变了CML-CP患者的生存结局，使致命的CML成为一种可控制的慢性疾病。但是，并非所有CML-CP患者对伊马替尼有确切的效果。IRIS10年的随访结果显示[59]，有15.9%的患者因伊马替尼治疗效果不理想而中止治疗，6.9%的患者因不良反应而停药。另一项长期随访的临床试验结果显示[2]，经伊马替尼400 mg qd治疗的CML-CP患者，10年的主要分子学反应（major molecular response,MMR）、分子学反应4（MR4）、分子学反应5（MR4.5）率分别为62.5%（56.6-68.2%）、49.5%（43.5-55.5%）、39.2%（33.5-45.2%）。另外，老年CML患者人群常合并不同的基础疾病，Crugnola等人[60]研究年龄＞75岁老年CML-CP患者对伊马替尼的疗效及安全性，中位随访45个月，仅有184例(69.9%)患者获得完全细胞遗传学缓解，148例(56.2%)获得MMR。这些结果表明，伊马替尼治疗的效果并不是预计的那么理想。
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结论
（1）氟马替尼、三氧化二砷、地西他滨、维奈托克单药均能抑制CML细胞的增殖。
（2）氟马替尼、地西他滨、三氧化二砷分别两药联合具有协同作用，其机制仍需进一步探讨。
参考文献（略）