本文是一篇医学论文，本研究提示在KD中，TGF-β1与miR-210-5p表达量为中等程度相关，TGF-βI型受体是miR-210-5p的直接靶基因。
第2章实验材料与方法
2.1实验材料
2.1.1病例组标本的收集
样本来源于在江西省儿童医院首次就诊并规范治疗及随诊的KD患儿。
KD组：纳入标准为：（1）年龄0-16岁；（2）诊断符合美国心脏病学会修订的2017版KD指南；（3）所有患儿均予IVIG及中大剂量阿司匹林治疗至体温正常72h后减为低剂量，若为IVIG耐药，则再此予IVIG治疗，仍耐药者加用糖皮质激素；（4）所有患儿均在急性期（起病1-10天）、亚急性期（起病11-20天）及恢复期（起病21-60天）行超声心动图检查并有结果记录。于急性期治疗前收集血浆样本90例。
NCAL组：除满足KD组入组标准外，病程各阶段随访冠状动脉内径≤3mm(5岁以上≤4mm)或Z值≤2.0（依据超声心动图结果）。
CAL组：除满足KD组入组标准外，病程各阶段随访冠状动脉内径≥3mm(5岁以上≥4mm)或Z值≥2.5（依据超声心动图结果）。
排除标准：（1）不能明确诊断为KD；（2）相关临床资料缺失；（3）未规范行超声心动图检查及随访；（4）既往有川崎病史或合并有心血管病史及其他风湿免疫性疾病史者。
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2.2主要试剂与仪器
2.2.1主要试剂
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第3章结果
3.1实验组的临床特征
对KD急性期差异miRNA验证阶段的两组病例基线数据进行对比，KD组与健康对照组间在性别比例、年龄构成上差异均无统计学意义，结果如下表所示（表7）。
对CAL相关的差异miRNA筛选阶段的两组病例基线数据进行对比，CAL组与NCAL组在性别比例、年龄构成、样本检测时机上差异均无统计学意义，结果如下表所示（表8）。
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3.2 KD急性期miRNA表达谱的筛选
3.2.1血浆外泌体形态鉴定
透射电子显微镜下，负染的大多数外泌体显示为50-150 nm杯状膜泡，形态符合外泌体结构，同时观察到少量10-20 nm的脂质颗粒（图1）。
将外泌体样本进行一定比例的稀释后，利用纳米粒子跟踪分析外泌体样本的浓度以及直径分布，结果提示所得外泌体符合检测浓度及尺寸范围（图2）。
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第3章 结果.................... 11
3.1 实验组的临床特征 .................. 11
3.2 KD 急性期 miRNA 表达谱的筛选 ........................ 12
第4章 讨论............................. 21
第5章 结论与展望 .................. 24
5.1 结论 .................................. 24
5.2 展望 ............................... 24
第4章讨论
与许多其他疾病不同，KD的诊断主要基于对临床表现的观察。川崎病的早期诊断是充分治疗的关键，然而，在没有特异性检测指标的情况下，KD诊断往往被忽视和延误。尽管KD曾被认为是一种急性自限性疾病，但目前已知KD可导致持续血管重塑和心肌纤维化的长期并发症[28]。因此，寻找KD特异性相关的生物标志物对疾病的及早干预以及改善预后具有重大的临床意义。
据报道[29]，大量的miRNA以促进或抑制疾病发展的方式参与KD的病理过程，主要涉及：免疫失衡、炎症反应及血管内皮损伤。也因此，miRNA被认为具有诊断生物标志物的潜力，且在研究中见报道。外泌体源性miRNA的变化可反映生理病理的改变，并显示出作为肿瘤、内分泌疾病、神经退行性疾病、和心血管疾病等诊断生物标志物的潜力，肿瘤特异性循环外泌体miRNA已被开发为肺癌的早期诊断生物标志物[13]。此前，KD相关的外泌体miRNA研究鲜见报道，而关于外泌体miRNA与细胞因子在KD病理机制中的研究尚未见报道。
若不仅局限于外泌体来源的miRNA，既往关于miRNA在川崎病诊断价值中的研究则相对多见。Wu等[30]研究表明血清miR-186在KD急性期上调，可以作为KD早期诊断的潜在血清标志物。Lv等[31]发现血清miR-122可被视为鉴别KD与某些发热性疾病的生物标志物。Ning等[32]研究发现，血小板miR-27a-3p、miR-92a-3p和miR-941在iKD患儿中差异表达。Weng等[33]研究表明，与健康儿童或病毒感染患儿相比，高表达水平的miR-24-3p可能提示KD复发。相关系统评价发现miRNA在KD诊断中的合并敏感性为70%，合并特异性为87%，提示miRNA对KD诊断具有中等的准确性[34]。为了明确KD急性期血浆外泌体miRNA差异性表达谱，本研究首先对10例KD患儿及5例健康儿童进行了血浆外泌体miRNA高通量测序，获得34条差异表达miRNA，且差异具有统计学意义（P＜0.05），并根据差异倍数及疾病关联纳入5条miRNA(miR-193a-5p、miR-203a-3p、miR-224-5p、let-7f-5p、let-7i-3p)进行验证。
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第5章结论与展望
5.1结论
（1）KD急性期患儿与健康儿童间存在大量差异表达的血浆外泌体miRNA。
（2）血浆外泌体miR-193a-5p、miR-203a-3p、miR-210-5p、miR-224-5p、let-7f-5p可作为KD诊断的潜在生物标志物。
（3）在KD中，血浆外泌体miR-210-5p与CAL相关，未来可能作为CAL的预测指标。
（4）TGF-β1、TNF-α可能参与KD的发病机制，并可能与miRNA的调控相关。
参考文献（略）