振荡运动联合黄芪注射液对雌鼠乳腺癌化疗相关性疲乏的影响

时间:2016-10-12 17:25来源:www.020lunwen.com 作者:feifei 点击:
本论文是护理学论文,笔者研究振荡运动联合黄芪注射液对 CRF 的影响并对可能机制进行初步探索,以提供 CRF 新的治疗方向和思路,为未来富有成效的 CRF 临床治疗和护理提供基础研究和理论。
前 言
 
一、研究背景
当今危害人类健康的三大疾病中,癌症位居第二位,仅次于心血管疾病。在中国,癌症负担逐年增加。根据 WHO 最近发布的 GLOBOCAN 2012,中国新增癌症病例为 306 万例,全球第一,占全球总数 20%,同期死亡病例 220 万例,占全球 25%;2012 年世界最常见确诊癌症是肺癌(182 万例),女性乳腺癌(167万例),肠癌(136 万例)[1]。
20 世纪 70 年代末距今 40 年间,全球乳腺癌发病率一直居女性恶性肿瘤之首。每天,世界上数以千计女性被诊断为乳腺癌。与西欧、北美等发达国家比较,中国虽属乳腺癌低发区,但自 90 年代以来,随着中国社会经济地位提高使得环境污染、城市化、高压力快节奏生活方式、饮食模式“西式化”等危险因素流行,和基于国情国策的特殊生育模式(晚婚晚育、低生育率、哺乳时间短),以及人口结构(老龄化)等因素影响,乳腺癌的发病率年增 3%~5%,增长速度高于世界平均水平,城市地区高发,尤其是经济发达的沿海城市(上海,大连,广州,天津等),年轻化趋势(诊断平均年龄 45~55 岁)[2,3]。目前,乳腺癌也成为中国女性最常见癌症,占所有女性癌症的 15%,死亡率占女性癌症的第 6 位,是 45 岁以下女性最常见癌症死因[4]。
值得注意的是,过去 30 年间,我国乳腺癌死亡率相对其发病率而言增加幅度表现的并不明显[3]。事实上,世界范围内乳腺癌死亡率总体呈下降趋势。发达国家北美、澳大利亚、日本和北欧 5 年生存率为 85%~90%,东欧和英国 75%~80%,中国 82%[5]。美国乳腺癌原位癌患者 5 年生存率甚至达 98%[2]。这在一定程度上要归因于乳房 X 线筛查的应用使乳腺癌确诊的病理分期提前和 MRI 的高检出率,以及激素、放化疗等辅助治疗的系统应用,新型药物的研发等诊疗技术进步[5,6]。持续升高的发病率和较好的预后使乳腺癌生存者数量远高于其它类型癌症患者。新医学模式下,临床治疗终末,对患者健康相关生活质量的评估成为衡量癌症治疗效果的一个指标。而与治疗相关的不良反应的客观评价是生活质量管理的重要部分。
自 1980 年开始进行的数百项随机试验肯定了化疗在治疗乳腺癌方面的作用[7]。因其在减小肿瘤大小,降低复发率,延长生存时间的满意表现而在治疗中占有重要地位,包括术前新辅助化疗和术后辅助化疗。中国乳腺癌辅助化疗流行,大约 81.4%的浸润性乳腺癌患者接受了辅助化疗[8]。然而,化疗药物无法识别健康组织细胞,导致毒副作用,80~96%乳腺癌患者化疗后出现疲乏[9,10],相较其它癌症患者更易有疲乏体验,常始于用药之初,随疗程进展加重,治疗结束后持续数周、数月甚至数年,并且是患者中断治疗的主要原因,影响治疗和预后,降低生活质量[11]。化疗相关性疲乏(Chemotherapy-related fatigue, CRF)属于癌因性疲乏范畴,是由于癌症治疗因素化疗引起的疲乏症状。不同于正常疲乏对机体的保护作用,2011 年 NCCN 发布的《癌因性疲乏临床实践指南》指出:CRF 带给患者是灾难性痛苦的疲惫乏力感,出现早,程度重,影响持久,不能用活动来解释,休息睡眠后不缓解,常伴功能障碍[12]。
ICD-10 给出了诊断标准[13]:疲乏症状反复出现>2 周;伴有≥5 个下列症状:①肢体沉重或全身无力;②注意力不能集中;③睡眠后精力仍不可恢复;④嗜睡或失眠;⑤缺乏激情、兴趣减少、情绪消沉;⑥活动困难;⑦短期记忆减退;⑧有情绪反应(如悲伤、易激惹或挫败感)⑨原先可以胜任的日常活动无法完成;⑩疲乏持续数小时不缓解。由此我们意识到这种疲乏不仅表现在躯体活动能力下降,也包括情感、认知方面的疲乏,有别于以往的运动性疲乏和慢性疲乏综合征。CRF 病因的潜在机制尚无清晰定论,普遍认为可能是多种途径共同作用结果。一种假说认为中枢神经系统,免疫调节通路,神经肌肉骨骼和心肺系统最终共同参与 CRF 形成。而在这其中,促炎因子被认为是一个重要因素[11]。研究认为,化疗药物的细胞毒性会激活体内固有免疫系统的“前哨细胞”(巨噬细胞,单核细胞,树状细胞,库普弗)产生免疫应答,生成和释放促炎因子到外周血中;释放到外周血中的促炎因子会通过体液或神经机制影响中枢神经系统并诱导中枢神经系统促炎因子生成;促炎因子诱导炎症级联反应,导致炎性细胞高度表达引起机体类似细菌或病毒感染时的病态行为,导致 CRF[14~17]。另外,睡眠紊乱,精神抑郁,少动、躯体功能障碍,发热、疼痛,多疾病共存,贫血,营养失衡等是发生CRF 的危险因素[12]。
......
 
二、研究目的
 
建立 SD 雌性大鼠 CRF 模型,通过观察大鼠一般情况、体质量、行为学实验(鼠尾悬挂实验、力竭游泳实验)和检测血清细胞因子 IL-β、TNF-α、IL-6 水平变化,研究振荡运动联合黄芪注射液对 CRF 的影响并对可能机制进行初步探索,以提供 CRF 新的治疗方向和思路,为未来富有成效的 CRF 临床治疗和护理提供基础研究和理论依据,进而提高乳腺癌治疗和护理质量。
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实验材料与方法
 
一、实验材料
(一) 实验动物
SPF 级雌性 SD 大鼠 80 只,体重 100~120g,购自锦州医科大学动物实验中心[许可证号:SCXK(京)2012-0001],饲养于锦州医科大学动物实验室。实验前,适应性喂养 7 天,分笼饲养,每笼 5 只;室内温度保持在 24±2℃,湿度40%~60%,昼夜交替 12h,自由进食饮水。
(二) 主要药品、试剂、细胞与仪器
1、药品、试剂、细胞
黄芪注射液 黑龙江珍宝岛药业股份有限公司
注射用盐酸表柔比星 浙江海正药业股份有限公司
大鼠 IL-1β 试剂盒 上海巧伊生物科技有限公司
大鼠 TNF-α 试剂盒 上海巧伊生物科技有限公司
大鼠 IL-6 试剂盒 上海巧伊生物科技有限公司
0.25%胰蛋白酶 美国 Gibco 公司
10%胎牛血清 美国 Gibco 公司
RPMI-1640 培养液 美国 Gibco 公司
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二、实验方法
(一)技术路线
(二)细胞培养
(二)细胞培养将冻存 SHZ-88 大鼠乳腺癌细胞复苏后,培养于含 10%FBS+100U/ml PNC+100μg/ml SM 的 RPMI-1640 培养液中,取对数生长期 SHZ-88 大鼠乳腺癌细胞,0.25%胰酶消化后,1:3 传代,隔天换液,每 2~3 天传 1 代,放置在 37℃的 5%CO2,95%湿度培养箱中扩增培养。
(三)乳腺癌雌性大鼠化疗相关性疲乏模型的建立
1、荷 SHZ-88 乳腺癌雌性大鼠模型建立与分组[41~43]
种植肿瘤前 1 天,剔除大鼠待接种部位(1cm×1cm)的毛。取对数生长期SHZ-88 大鼠乳腺癌细胞,经 0.25%胰酶消化收集细胞,1000r/min 离心 5min 后弃去上清液,PBS 稀释调整细胞悬液浓度至 5×107个/ml。接种前,碘伏消毒接种区,0.2ml 每只(1×107个)缓慢皮下注射在大鼠右侧近腋窝第 2 乳腺脂肪垫处,形成一皮丘;接种后,棉签轻压 1min,防止细胞悬液外溢,再次碘伏消毒。选取瘤块单一,体积 0.5cm3~0.8cm3左右,瘤块表面皮肤无破溃,皮毛无脱落的大鼠,随机分为模型组(M),黄芪组(H),低频率短时间组(LS),中频率长时间组(ML),低频率短时间+黄芪组(LS+H),中频率长时间+黄芪组(ML+H),每组 8 只,另有 8 只健康大鼠为正常对照组(N)。
......
 
前言......................................11
实验材料与方法............................15
结果......................................19
讨论......................................23
结论......................................32
四、本研究创新性的自我评价................33
五、参考文献 ...................................... 34
 
讨 论
 
一、雌性大鼠乳腺癌化疗相关性疲乏模型的建立
现有条件下缺乏有效的动物实验模型是阻碍CRF潜在机制研究及其治疗措施发展的一个原因。动物模型是医学研究中一个重要的实验方法和手段,对于探讨疾病机理及疗效机制有其优越性(实验条件可控,干扰性小,实验操作不受限制,结果易于收集等),广泛应用于疾病基础研究。目前关于大鼠乳腺癌化疗相关性疲乏模型的研究还很少,国内欧阳明子[50]应用紫杉醇对荷 4T1 乳腺癌 BALB/c 小鼠单纯化疗进行 CRF 的研究,国外 Zombeck[44]应用多柔比星对未荷瘤 ICR 小鼠单纯化疗,通过跑轮实验,旷场实验,旋转杆实验及血标本、体质量指标测定评价,成功建立 CRF 动物模型。本课题参考国内外相关研究,建立 CRF 实验动物模型。
实验选用 SHZ-88 大鼠乳腺癌细胞株,通过移植法复制大鼠乳腺癌模型。SHZ-88 细胞系是 1987 年由南京铁道医学院病理实验室从 7.12-二甲基苯并蒽(DMBA)诱发的乳腺癌大鼠身上提取癌组织,经体外连续传代培养,获得的性状稳定的大鼠乳腺癌细胞;倒置显微镜下观察 SHZ-88 瘤细胞单层贴壁生长,大小不一,呈多边形,核分裂相易见;电镜下观察,核膜厚、核大,胞浆及核内易见假包涵体;瘤细胞生长快,易于培养,有致瘤性,移植到同种动物中可成瘤[41,42]。种植部位选择在大鼠右侧近腋窝第 2 乳腺脂肪垫处,满足肿瘤接近原位生长要求,且皮下间隙较大,不影响荷瘤大鼠的活动,对肿瘤有较好的耐受性,SHZ-88 侵袭力弱,不易发生转移,利于后续实验操作。实验中移植肿瘤的 72 只大鼠,56 只成瘤,成瘤率 77.8%;实验期间,肿瘤生长情况较好,7 天左右即可在体表摸到肿瘤结节,成瘤时间相对一致,生长速度均衡,优于化学药物诱导型和自发型模型。
筛选成瘤大鼠进行化疗,结合预实验结果,参考 Zombeck 化疗方案[44],选用表柔比星进行单纯 2 周期化疗。选择表柔比星是因为它是乳腺癌化疗一线药物[6],与阿霉素为同分异构体且心脏毒性远低于阿霉素,同属蒽环类,临床应用表明疲乏发生率高且迅速[9,51]。入选的 48 只成瘤大鼠全部成功完成化疗,期间无死亡,完成率 100%。通过进行鼠尾悬挂实验,力竭游泳实验(行为学测定疲乏的经典实验)及一般情况观察,体质量监测评价疲乏。鼠尾悬挂实验侧重评价心理疲乏,力竭游泳实验侧重评价躯体疲乏。与正常组比较,实施化疗造模后,各组鼠尾悬挂实验时间延长,力竭游泳时间缩短,精神萎靡少动,饮水进食减少,体质量不增,表现出躯体、心理双重疲乏症状;各化疗组间比较无差异,提示各组疲乏程度均一,有利于后续实验进行。而化疗前植瘤后,与正常组比较,各组鼠尾悬挂实验时间,力竭游泳时间,体质量及一般情况比较无明显变化,提示早期瘤体因素未引起疲乏发生。实验干预 4 周后,模型组与正常比较,上述指标差异有统计学意义,提示疲乏症状持续存在,与临床患者化疗疲乏特点相符[52],由此认为大鼠 CRF 模型建立成立。综上,该法操作简单,可靠可重复,建模周期短,经济,为探讨 CRF 疾病机理及疗效机制提供理想模型。
......
 
结 论
 
1、表柔比星化疗荷 SHZ-88 乳腺癌雌性大鼠建立 CRF 模型成立,疲乏程度均一,持续时间长,与临床 CRF 症状特点相符,操作简单经济,适用于 CRF 相关研究。
2、蒽环类化疗药表柔比星使血清炎性细胞因子 IL-1β、TNF-α 含量上调可能是 CRF 发生的一个潜在原因。
3、振荡运动联合黄芪注射液具有协同抗 CRF 作用。
4、下调促炎症因子,上调抗炎因子可能是振荡运动联合黄芪注射液减轻雌性大鼠 CRF 的一个潜在机制。
......
参考文献(略)
 
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