反刍动物血液尿酸氧化酶活性及药理实验研究

时间:2014-11-04 15:47来源:www.020lunwen.com 作者:afen 点击:
本文为药理学论文,主要研究不同反刍动物血液尿酸氧化酶活性,冷冻干燥对血液尿酸氧化酶活性的影响以及鹿血灌注对鸡小肠内外尿酸浓度的影响进行了研究,为鹿血的开发利用提供理论依据
第一章前 言

每天有大量的微生物生长的反当动物瘤胃,瘤胃微生物随食糜流过真胃再进入小肠,供给宿主蛋白。在流入小肠的微生物氮中,有11%-17%为核酸氮,其中含有一定比例的嚼呤,所以反当动物都有有效的噴呤代谢途径和排除系统。噴呤衍生物中的尿酸在体内的溶解度比较低,所以反当动物必须把尿酸转变成溶解度比较高的尿囊素排除体外,才不至于使尿酸在体内沉积。在体内,通过尿酸氧化酶把尿酸氧化成尿囊素。北美马鹿和梅花鹿血液中尿酸氧化酶活性很高,小肠内也有较高的尿酸氧化酶活性。
...................................

1.1尿酸氧化酶概括
尿酸氧化酶(Uricase)是生物体内噴呤降解代谢途径中的一种酶,能够催化尿酸氧化生成尿囊素、过氧化氢和二氧化碳,尿酸氧化酶以氧作为受体在许多物种中均发现有尿酸氧化酶存在,但其酶活性高低不同相差很大,在高等哺乳动物(猿和人类)体内却缺乏有生物活性的尿酸氧化酶,因而尿酸就生成为噪呤代谢的最终产物并随之排出体外。在血液中尿酸及其盐类溶解度很低,如果体内嘌呤代谢发生紊乱,产生过量尿酸,长期滞留体内,或者尿酸排泄受阻,就会导致血液中尿酸浓度增高,形成高尿酸症,长期尿酸浓度过高容易就引起痛风在临床上,痛风、高尿酸血症和肿瘤溶解综合征的治疗现在都依赖尿酸氧化酶,酶浓度的高低间接反应了疾病因此尿酸氧化酶是一种重要的医药用酶。
1.1.1尿酸氧化酶的结构
由于尿酸氧化酶的来源不尽同,而且种类繁多,尿酸氧化酶的结构也不同。它能催化尿酸氧化为尿囊素,由四个相同的亚基组成,每个亚基含301个AA,分子量为34 KD左右,有生物活性的天然UOX是四聚体结构,球形,外部尺寸为50X50A,外形为空圆柱类似一个无盖、无底的空桶,内腔孔道长度为50A,直径12A。UOX的形成是由亚基A、B间,亚基C、D间通过氛键作用形成二聚体,后两个二聚体(A+B,C+D)通过氧键作用面对面的堆积组装成四聚体结构,其结构完全由氧键维系组成,UOX的四个亚基间没有共价连接。在亚基一亚基的界面处存在4个催化位点。微生物来源的尿酸氧化酶的分子量从120?150kD大小不等,其纯品由相同或不同的亚基组成,如Bacillus fastidiosus就是由两个39 kD和两个36kD的亚基组成的,而Athrobacter globiformis则由四个相同的的亚基组成,,Bacillus sp . strain TB290是由61kD,12kD,和llkD的三个亚基组成的。而Candi2dautils产的尿酸氧化酶则是由两个34 kD的亚基组成的二聚体。不同来源的尿酸氧化酶的结构不同,来源相同的尿酸氧化酶其结构也不相同。
...................................

第二章反自动物血清和血细胞中尿酸氧化酶活性研究

本实验对不同反当动物(梅花鹿,驯鹿,山羊)血清和红细胞尿酸氧化酶活性进行研究,结果表明不同种类动物体内尿酸氧化酶活性不同。
...............................................

2.1材料和方法
2.1.1材料
2.1.1.1仪器设备手术剪、超声清洗仪、分析天平、751分光光度计、酸度计、水浴锅、采血管、试管
2.1.1.2药品尿酸(Sigma色谱级试剂)、憐酸二氢钠、憐酸氢二钠、氢氧化钾
2.1.1.3血样采集制备随机选择健康的梅花鹿、驯鹿、羊的血,4V 2500r/min 15分钟离心,分别保存血清和血细胞。
2.1.2方法
2.1.2. 1磷酸缓冲液的配置取15. 6g憐酸二氢钠溶于500ml蒸馆水中,取35. 82g憐酸氧二钠溶于500nil蒸懷水中,混勾后,取5. 3ml憐酸二氢钠溶液,94. 7ml磷酸氢二钠溶液。
2.1.2.2尿酸标准溶液的制备将尿酸标准样品(Sigma色谱级试剂)溶于碱化的热水(用稀的氢氧化钾调节pH值为10)中,当尿酸溶解后再用稀磷酸调节pH为7,配制成IN的母液。分别取2. 5、5、7.5、10、15、20inl母液定容到100ml,配制成浓度为50、75、100、150、200微摩尔的尿酸溶液,以蒸饱水为空白样,利用751紫外分光光度计在260nin处测定A值,绘制标准曲线,并得出回归方程,利用回归方程计算尿液中的尿酸当量。
2.1.2.3尿酸氧化酶活性测定由于尿酸在293nin处有光吸收,可以利用751紫外分光光度计检测尿酸的吸光度的降低来测定尿酸氧化酶的活性。取驯鹿、梅花鹿和羊的血液,4V 2500r/inin离心后,将上清液移于另一试管,与底部的血细胞一样冷藏备用。分别各取处理好的驯鹿、梅花鹿和羊的血清Oul、500ul、1 OOOul和1 500ul于100ml的容量瓶中,再取尿酸母液10ml于各个容量瓶中,放入4(rC水浴锅,每隔Ih测一次吸光度。取鹿的血细胞和羊的血细胞Oul、500ul、1 OOOul和1 500ul。于100ml容量瓶中再取尿酸母液10ml于各个容量瓶中,放入4(rC水浴锅,每隔Ih测一次吸光度,计算不同时间溶液中尿酸的浓度。
2.1.2.4数据统计分析数据釆用Excel2003和SPSS13.0软件辅助进行统计分析,平均值土标准误差(X士SD),统计显著水平预设为P<0. 05。
.........................................

第三章 冻干的鹿血粉中的尿酸氧化酶活性................ 23-26 
3.1 材料与方法 ..................23-24 
3.2 结果 ....................24-25 
3.3 讨论 ......................25-26

第四章 鹿血液中尿酸氧化酶活性药理实验

高尿酸血症病人常服用吸附剂,如活性炭和蒙脱石吸附肠道内的尿酸使食糜中液体部门的尿酸浓度低于血液中的浓度,血液中的尿酸可以依浓度梯度渐渐扩散到肠腔中到达低落血尿酸的目标。但该要领治疗有肯定的范围性,由于这些吸附剂没有选择性,恒久利用会造成小分子微量营养身分如维生素和微量元素等的缺乏。要是鹿血中的尿酸氧化酶在肠道中仍可发挥作用,可特异性地剖析尿酸,那么血液中的尿酸就可不停地扩散到肠腔内,血液中尿酸浓度低落,到达低落血尿酸的目标。本研究釆用鸡肠囊贯注鹿血制剂,在尿酸溶液中孵育,查抄差别时间肠外尿酸的浓度,模仿服用鹿血制剂后是否会到达低落流经肠道血液尿酸浓度的目标,以探究口服鹿血制剂低落血尿酸的可行性。
4. 1材料与方法
4.1.1仪器设备试剂AUY220电子天平、PHS-3C型数显酸度仪、电热恒温鼓风干燥箱、电子恒温水浴锅、量筒、容量瓶(1000ml和100ml)、751紫外分光光度计、FD-1-50真空冷冻干燥机、BQ250-超声波清洗器、剪刀、镊子、离心机鹿冻干血粉、梅花鹿血、驯鹿血、鸡、尿酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、生理盐水。
.......................................

结论

5.1梅花鹿和山羊血清中尿酸氧化酶活性较高,驯鹿血清中尿酸氧化酶活性低于梅花鹿和山羊血清中尿酸氧化酶活性。梅花鹿和山羊血细胞也有尿酸氧化酶活性,但低于血清中的活性
5.2冻干后的梅花鹿血粉仍然具有尿酸氧化酶活性。
5.3梅花鹿血液制品灌装于鸡小肠肠囊中,可有效降低肠囊外液中尿酸的浓度。
...................................
参考文献(略) 
医学论文网提供医学职称论文


------分隔线----------------------------
发表评论
请自觉遵守互联网相关的政策法规,严禁发布色情、暴力、反动的言论。
评价:
医学论文网联系方式
推荐内容